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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞凋亡與增殖>> FITC-Brdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)
活細(xì)胞染色液(Hoechst 33342)(100×)
細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(WST-1法)
貨號(hào) | FS-X9594 |
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中文名稱:FITC-Brdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)
英文名稱:BrdU cell proliferation Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T
貨號(hào):FS-X9594
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒細(xì)胞增殖檢測(cè)是一個(gè)基于熒光檢測(cè)的實(shí)驗(yàn),可以監(jiān)測(cè)細(xì)胞健康和通過(guò)胸苷摻合來(lái)估量DNA 合成從而監(jiān)測(cè)細(xì)胞分裂。 溴脫氧尿苷(5-溴代-2'-脫氧尿苷, BrdU) 是一種合成的核苷酸即胸苷的類似物。BrdU 通常被用于檢測(cè)活組織中再生的細(xì)胞。 BrdU 可以摻合到復(fù)制細(xì)胞中新的合成DNA 中(在細(xì)胞周期S 期),在DNA 復(fù)制可代替胸苷。利用抗BrdU 的特異性抗體便可以用于檢測(cè)這個(gè)插入的化學(xué)品,從而檢測(cè)出細(xì)胞是否在復(fù)制其DNA。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
外切mei體成分8(EXOSC8)檢測(cè)試劑盒 forExosomeComponent8(EXOSC8)
骨調(diào)蛋白(OMD)檢測(cè)試劑盒 forOsteomodulin(OMD)
己糖激mei1(HK1)檢測(cè)試劑盒 forHexokinase1(HK1)
促卵泡su(FSH)檢測(cè)試劑盒 forFollicleStimulatingHormone(FSH)
過(guò)氧化還原mei4(PRDX4)檢測(cè)試劑盒 forPeroxiredoxin4(PRDX4)
高香草suan(HVA)檢測(cè)試劑盒 forHomovanillicAcid(HVA)
張力蛋白3(TNS3)檢測(cè)試劑盒 forTensin3(TNS3)
抗神經(jīng)元核抗體2型(ANNA2)檢測(cè)試劑盒 forAnti-NeuronalNuclearAntibody2(ANNA2)
白介su6(IL6)檢測(cè)試劑盒 forInterleukin6(IL6)
巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP1α)檢測(cè)試劑盒 forMacrophageInflammatoryProtein1Alpha(MIP1a)
肝癌源性生長(zhǎng)因子(HDGF)檢測(cè)試劑盒 forHepatomaDerivedGrowthFactor(HDGF)
胰島su樣生長(zhǎng)因子1(IGF1)檢測(cè)試劑盒 forInsulinLikeGrowthFactor1(IGF1)
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白B(SPB)檢測(cè)試劑盒 forSurfactantAssociatedProteinB(SPB)
鈉/氫交換因子1(NHE1)檢測(cè)試劑盒 forSodium/HydrogenExchanger1(NHE1)
胱天蛋白mei3(P3)檢測(cè)試劑盒 forCaspase3(P3)
葡萄糖磷suan變位mei5(PGM5)檢測(cè)試劑盒 forPhosphoglucomutase5(PGM5)
白介su1受體Ⅱ(IL1R2)檢測(cè)試劑盒 forInterleukin1ReceptorTypeII(IL1R2)
FITC-Brdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)比沙標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:125mg 英文名稱:Bisacodyl
氨基己suan標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Aminocaproic Acid
lv化乙酰標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Acetylcholine Chloride
肌suan酐標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Creatinine
lv舒隆標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Clorsulon
L-酪氨suan標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:500mg 英文名稱:L-Tyrosine
碘帕chun相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:50mg 英文名稱:
碘帕chun標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Iopamidol
噴丁標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:250mg 英文名稱:Gabapentin
一水合標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:50mg 英文名稱:Morphine Monohydrate CII (AS)
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