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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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FITC-Brdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)

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更新時(shí)間:2022-05-09 11:47:21瀏覽次數(shù):144次

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貨號(hào) FS-X9594
FITC-Brdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)正在熱銷的產(chǎn)品:濾紙mei測(cè)試盒 規(guī)格:100管/48樣 測(cè)試方法:微量法
濾紙mei測(cè)試盒 規(guī)格:50管/24樣 測(cè)試方法:可見(jiàn)分光光度法
β-葡萄糖醛suanmei(β-GD)試劑盒 規(guī)格:100管/96樣 測(cè)試方法:微量法
β-葡萄糖醛suanmei(β-GD)試劑盒 規(guī)格:50管/48樣 測(cè)試方法:可見(jiàn)分光光度法
葡萄糖脫氫

中文名稱:FITC-Brdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)

英文名稱:BrdU cell proliferation Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格:20T

貨號(hào):FS-X9594

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒細(xì)胞增殖檢測(cè)是一個(gè)基于熒光檢測(cè)的實(shí)驗(yàn),可以監(jiān)測(cè)細(xì)胞健康和通過(guò)胸苷摻合來(lái)估量DNA 合成從而監(jiān)測(cè)細(xì)胞分裂。

溴脫氧尿苷(5-溴代-2'-脫氧尿苷, BrdU) 是一種合成的核苷酸即胸苷的類似物。BrdU 通常被用于檢測(cè)活組織中再生的細(xì)胞。

BrdU 可以摻合到復(fù)制細(xì)胞中新的合成DNA 中(在細(xì)胞周期S 期),在DNA 復(fù)制可代替胸苷。利用抗BrdU 的特異性抗體便可以用于檢測(cè)這個(gè)插入的化學(xué)品,從而檢測(cè)出細(xì)胞是否在復(fù)制其DNA。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

外切mei體成分8(EXOSC8)檢測(cè)試劑盒  forExosomeComponent8(EXOSC8)    

骨調(diào)蛋白(OMD)檢測(cè)試劑盒  forOsteomodulin(OMD)    

己糖激mei1(HK1)檢測(cè)試劑盒  forHexokinase1(HK1)    

促卵泡su(FSH)檢測(cè)試劑盒  forFollicleStimulatingHormone(FSH)    

過(guò)氧化還原mei4(PRDX4)檢測(cè)試劑盒  forPeroxiredoxin4(PRDX4)    

高香草suan(HVA)檢測(cè)試劑盒  forHomovanillicAcid(HVA)    

張力蛋白3(TNS3)檢測(cè)試劑盒  forTensin3(TNS3)    

抗神經(jīng)元核抗體2型(ANNA2)檢測(cè)試劑盒  forAnti-NeuronalNuclearAntibody2(ANNA2)    

白介su6(IL6)檢測(cè)試劑盒  forInterleukin6(IL6)    

巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP1α)檢測(cè)試劑盒  forMacrophageInflammatoryProtein1Alpha(MIP1a)    

肝癌源性生長(zhǎng)因子(HDGF)檢測(cè)試劑盒  forHepatomaDerivedGrowthFactor(HDGF)    

胰島su樣生長(zhǎng)因子1(IGF1)檢測(cè)試劑盒  forInsulinLikeGrowthFactor1(IGF1)    

表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白B(SPB)檢測(cè)試劑盒  forSurfactantAssociatedProteinB(SPB)    

/氫交換因子1(NHE1)檢測(cè)試劑盒  forSodium/HydrogenExchanger1(NHE1)    

胱天蛋白mei3(P3)檢測(cè)試劑盒  forCaspase3(P3)    

葡萄糖磷suan變位mei5(PGM5)檢測(cè)試劑盒  forPhosphoglucomutase5(PGM5)    

白介su1受體Ⅱ(IL1R2)檢測(cè)試劑盒  forInterleukin1ReceptorTypeII(IL1R2)    
FITC-Brdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)比沙標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:125mg  英文名稱:Bisacodyl

氨基己suan標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Aminocaproic Acid

lv化乙酰標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Acetylcholine Chloride

suan酐標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:100mg  英文名稱:Creatinine

lv舒隆標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Clorsulon

L-酪氨suan標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:500mg  英文名稱:L-Tyrosine

碘帕chun相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:50mg  英文名稱:

碘帕chun標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Iopamidol

噴丁標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:250mg  英文名稱:Gabapentin

一水合標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:50mg  英文名稱:Morphine Monohydrate CII (AS)

 


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