彗星電泳法檢測(cè)細(xì)胞損傷試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9582

產(chǎn)品介紹:

DNA 在自由基（如·OH）的攻擊下容易發(fā)生損傷，即脫氧戊糖遭到破壞，磷酸二脂鍵的斷裂，堿基的破壞或脫落，便可進(jìn)一步產(chǎn)生單鏈斷裂或雙鏈斷裂。將細(xì)胞固定于低熔點(diǎn)瓊脂糖中，取少量細(xì)胞涂在載玻片上，用堿高鹽溶液破壞細(xì)胞膜，再用堿溶液使DNA 分子解旋。將載玻片置于電泳液中，在電場(chǎng)的作用下，DNA 分子向陽(yáng)極移動(dòng)。如果DNA 損傷嚴(yán)重，碎片多，則電泳速度快。未受損傷的DNA 大分子則由于細(xì)胞膜的阻隔，滯留在原處。用PI 染色或銀染，可觀察到DNA 受損的細(xì)胞形同彗星現(xiàn)象，作定性分析。也可用相關(guān)的軟件作定量分析。

中文名稱：彗星電泳法檢測(cè)細(xì)胞損傷試劑盒

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：20T|100T|50T

貨號(hào)：FS-X9582

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：anti-Sa-Ab ELISA Kit，anti-Sa-Ab，

金屬硫蛋白2(MT2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MT2 ELISA Kit，MT2，

新生jia狀腺su(NN-T4)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：NN-T4 ELISA Kit，NN-T4，

細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ICAM-1/CD54 ELISA Kit，ICAM-1/CD54，

纖維蛋白(Fibrin)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Fibrin ELISA Kit，F(xiàn)ibrin，

維生suD3(VD3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：VD3 ELISA Kit，VD3，

銅鋅-過(guò)氧化物岐化mei(SOD1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SOD1 ELISA Kit，SOD1，

羰基還原mei[NADPH] 1(CBR1/CBR/CRN)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CBR1/CBR/CRN ELISA Kit，CBR1/CBR/CRN，

suan性神經(jīng)鞘磷脂mei(ASM)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ASM ELISA Kit，ASM，

受磷蛋白(PLN)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PLN ELISA Kit，PLN，

腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ACA ELISA Kit，ACA，

沙漠刺猬因子(DHH)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DHH ELISA Kit，DHH，

熱休克蛋白72(HSP72)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：HSP72 ELISA Kit，HSP72，

Aprataxin蛋白(APTX)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：APTX ELISA Kit，APTX，

90kDa熱休克蛋白αA1(HSP90αA1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：HSP90αA1 ELISA Kit，HSP90αA1，

Ⅹ型膠原(COL10)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：COL10 ELISA Kit，COL10，

210kDa核孔蛋白(NUP210)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：NUP210 ELISA Kit，NUP210，
彗星電泳法檢測(cè)細(xì)胞損傷試劑盒jia磺suan酚妥拉明標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Phentolamine Mesylate

tong康z(mì)uo標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Ketoconazole

異山75％溶液標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Isosorbide (75% solution)

鹽suan育亨賓標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Yohimbine Hydrochloride

17- 雌二chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：17alpha-Dihydroequilin

秋水仙su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:350mg 英文名稱：Colchicine

托普利二硫化物標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Captopril Disulfide

jiaben磺丁脲標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Tolbutamide

鹽suan四環(huán)su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Tetracycline Hydrochloride

巴噴丁相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：