細(xì)胞凋亡DNA斷裂片段提取試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9525

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒是針對細(xì)胞凋亡過程中產(chǎn)生的核小體間DNA鏈斷裂而設(shè)計的。可以非常有效地抽提小片段為180-200bp的DNA ladder，同時又可以抽提到50kb以上的基因組DNA。DNA ladder也稱DNA fragmentation，是細(xì)胞凋亡的一個重要指標(biāo)。通常觀察到DNA ladder，就可以判定細(xì)胞發(fā)生了凋亡。本試劑盒足夠抽提50個細(xì)胞或組織樣品。

試劑盒組份：

樣品裂解液———30ml

蛋白酶K————130μl

10M 醋酸銨——6ml

TE——————6ml

注意事項(xiàng)：需自備Tris平衡苯、和無水乙醇。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

中文名稱：細(xì)胞凋亡DNA斷裂片段提取試劑盒

英文名稱：DNA fragmentation Extraction Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50次

貨號：FS-X9525

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

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脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)elisa檢測試劑盒英文名稱：DNase-Ⅰ ELISA Kit，DNase-Ⅰ，

H2A組蛋白家族成員V(H2AFV)elisa檢測試劑盒英文名稱：H2AFV ELISA Kit，H2AFV，

Desmuslin蛋白(DMN)elisa檢測試劑盒英文名稱：DMN ELISA Kit，DMN，

FK506結(jié)合蛋白5(FKBP5)elisa檢測試劑盒英文名稱：FKBP5 ELISA Kit，F(xiàn)KBP5，

CopineⅤ蛋白(CPNE5)elisa檢測試劑盒英文名稱：CPNE5 ELISA Kit，CPNE5，

Cathelicidin抗菌肽(CAMP)elisa檢測試劑盒英文名稱：CAMP ELISA Kit，CAMP，

ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G1(ABCG1)elisa檢測試劑盒英文名稱：ABCG1 ELISA Kit，ABCG1，

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Ⅰ型前膠原羧基端原肽(PⅠCP)elisa檢測試劑盒英文名稱：PⅠCP ELISA Kit，PⅠCP，

50kDa核孔蛋白(NUP50)elisa檢測試劑盒英文名稱：NUP50 ELISA Kit，NUP50，

轉(zhuǎn)化生長因子-β誘導(dǎo)蛋白IG-H3(TGFBI/BIGH3)elisa檢測試劑盒英文名稱：TGFBI/BIGH3 ELISA Kit，TGFBI/BIGH3，

腫瘤壞死因子超家族15(TL1A/TNFSF15)elisa檢測試劑盒英文名稱：TL1A/TNFSF15 ELISA Kit，TL1A/TNFSF15，

心鈉肽(ANP)檢測試劑盒 forAtrialNatriureticPeptide(ANP)

拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱβ(TOP2β)檢測試劑盒 forTopoisomeraseIIBeta(TOP2b)
細(xì)胞凋亡DNA斷裂片段提取試劑盒紅素相關(guān)物質(zhì)N標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

嗪酰胺標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Pyrazinamide

(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：

酰胺標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Niacinamide (Vitamin B3)

異丙苯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1.2ml×3ampules 英文名稱：Cumene

甲酚曲唑三硅氧烷相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

醋酸倍松標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Betamethasone Acetate

阿散酸標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Arsanilic Acid

琥珀酸美托爾標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Metoprolol Succinate

雄胺標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Finasteride

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