kFluor555-EdU法細(xì)胞增殖檢測試劑盒(流式)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9617

中文名稱：kFluor555-EdU法細(xì)胞增殖檢測試劑盒(流式)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：10T|20T|50T

貨號：FS-X9617

產(chǎn)品介紹:

kFlour555 Click-iT EdU 流式檢測試劑盒,細(xì)胞增殖檢測是評估細(xì)胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)手段。精確的檢測細(xì)胞增殖方法是BrdU法。EdU法檢測試劑盒是brdu方法的革命性突破。EdU（5-溴-2-脫氧尿嘧）試劑盒是一種嘧啶類似物，可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。EdU法檢測是基于“點(diǎn)擊"反應(yīng)，一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴的原子共價(jià)反應(yīng)。本試劑盒中，EdU試劑含有炔烴，而kFlour555染料試劑含有疊氮化合物。點(diǎn)擊法的EdU標(biāo)記增殖快速有效，易于使用。只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標(biāo)記出整合的EdU。標(biāo)準(zhǔn)化的固定和去污劑促滲可以使檢測試劑進(jìn)入細(xì)胞，而brdu方法則需要DNA變性（如酸變性、熱變性或者用Dnase消化）去暴露BrdU，從而方便BrdU抗體結(jié)合。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

蛋白激meiD1(PRKD1)檢測試劑盒 forProteinKinaseD1(PKD1)

晶狀體蛋白αB(CRYαB)檢測試劑盒 forCrystallinAlphaB(CRYaB)

乙基丙二suan腦病變基因1(ETHE1)檢測試劑盒 forEthylmalonicEncephalopathy1(ETHE1)

絲氨suan/蘇氨suan激mei11(STK11)檢測試劑盒 forSerine/ThreonineKinase11(STK11)

160kDa核孔蛋白(NUP160)檢測試劑盒 forNucleoporin160kDa(NUP160)

親核suα7(KPNα7)檢測試劑盒 forKaryopherinAlpha7(KPNa7)

鯡精an激mei(DOLK)檢測試劑盒 forDolicholKinase(DOLK)

含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)檢測試劑盒 forVonWillebrandFactorADomainContainingProtein3A(vWA3A)

白介su18(IL18)檢測試劑盒 forInterleukin18(IL18)

腦蛋白44(BRP44)檢測試劑盒 forBrainProtein44(BRP44)

TATA框結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)因子12(TAF12)檢測試劑盒 forTATABoxBindingProteinAssociatedFactor12(TAF12)

突觸囊泡蛋白Ⅴ(SYT5)檢測試劑盒 forSynaptotagminV(SYT5)

組蛋白H2B(H2B)檢測試劑盒 forHistoneH2B(H2B)

高分子量激肽原(HMWK)檢測試劑盒 forHighMolecularWeightKininogen(HMWK)

破骨細(xì)胞關(guān)聯(lián)受體(OSCAR)檢測試劑盒 forOsteoclastAssociatedReceptor(OSCAR)

Smad同源物7(Smad7)檢測試劑盒 forMothersAgainstDecapentaplegicHomolog7(Smad7)

巨噬細(xì)胞集落刺激因子(MCSF)檢測試劑盒 forColonyStimulatingFactor1,Macrophage(MCSF)
kFluor555-EdU法細(xì)胞增殖檢測試劑盒(流式)標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：Cocaine Hydrochloride CII

標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Methocarbamol

mi托擔(dān)標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Mitotane

雌酚tong標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Estrone

鹽suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

N-乙基標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:0．5ml 英文名稱：N-Ethylpiperazine

lv霉su棕櫚suan酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Chloramphenicol Palmitate

無味lv霉suA晶型標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：

lv霉suA多晶型標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：

去乙?；Z孕酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Deacetylnorgestimate