細胞活力快速檢測試劑盒(Luminescent)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9604

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：500T

貨號：FS-X9604

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒是通過對ATP 進行定量測定來檢測培養(yǎng)物中活細胞數(shù)目的一種均質(zhì)檢測方法。ATP 是活細胞新陳代謝的一個指標。細胞活力快速檢測試劑盒為多孔板而設(shè)計，是進行自動化高通量篩選(HTS)、細胞增殖和毒性分析的理想選擇。均質(zhì)檢測步驟就是將單一試劑直接加入含有血清的培養(yǎng)細胞中，無需洗滌細胞、去除培養(yǎng)基或進行多步加樣操作。在384 孔板上，加入試劑并混合后，10 分鐘內(nèi)，該系統(tǒng)可檢測到的每個孔內(nèi)的細胞數(shù)為15 個。

均質(zhì)檢測的" 加樣-混合-檢測" 的操作方案使得細胞裂解和產(chǎn)生的發(fā)光信號與存在ATP 量成正比，而ATP 量直接與培養(yǎng)物中的細胞數(shù)量成正比。細胞活力快速檢測試劑盒產(chǎn)生一種"輝光型" 的發(fā)光信號，半衰期一般大于5 小時，因細胞類型和培養(yǎng)基而異。由于信號半衰期長，不需要使用試劑自動進樣器，就可靈活地進行連續(xù)的或批量的多孔板處理。*的均質(zhì)檢測方案避免了那些需要多個步驟的ATP 檢測方法可能會引入的誤差。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

磷suanmeiPP2A癌性抑制物(CIP2A)elisa檢測試劑盒英文名稱：CIP2A ELISA Kit，CIP2A，

類白細胞抗原G(HLA-G)elisa檢測試劑盒英文名稱：HLA-G ELISA Kit，HLA-G，

可溶性核因子κB受體活化因子(sRANK)elisa檢測試劑盒英文名稱：sRANK ELISA Kit，sRANK，

人抗異質(zhì)型核糖核蛋白抗體/抗RA33抗體(anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab)elisa檢測試劑盒英文名稱：anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab ELISA Kit，anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab，

人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)elisa檢測試劑盒英文名稱：anti-chromosome Ab ELISA Kit，anti-chromosome Ab，

血小板衍化生長因子(PDGF)elisa檢測試劑盒英文名稱：PDGF ELISA Kit，PDGF，

血管緊張suⅡ受體2(AT2R)elisa檢測試劑盒英文名稱：AT2R ELISA Kit，AT2R，

血紅su加氧mei(HO)elisa檢測試劑盒英文名稱：HO ELISA Kit，HO，

鋅轉(zhuǎn)運蛋白6(ZnT6)elisa檢測試劑盒英文名稱：ZnT6 ELISA Kit，ZnT6，

纖溶mei原激活物抑制因子1(PAI-1)elisa檢測試劑盒英文名稱：PAI-1 ELISA Kit，PAI-1，

細胞毒su相關(guān)蛋白A(CagA)elisa檢測試劑盒英文名稱：CagA ELISA Kit，CagA，

維生suC(VC)elisa檢測試劑盒英文名稱：VC ELISA Kit，VC，

同型半胱氨suan(Hcy)elisa檢測試劑盒英文名稱：Hcy ELISA Kit，Hcy，

mei3(CA3)elisa檢測試劑盒英文名稱：CA3 ELISA Kit，CA3，

suan性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)elisa檢測試劑盒英文名稱：aFGF-1 ELISA Kit，aFGF-1，

嗜suan性白血球相關(guān)之RNA水解酵su家族成員3(EAR3)elisa檢測試劑盒英文名稱：EAR3 ELISA Kit，EAR3，

CytospinB蛋白(CYTSB)elisa檢測試劑盒英文名稱：CYTSB ELISA Kit，CYTSB，
細胞活力快速檢測試劑盒(Luminescent)D-(-)-果糖標準品規(guī)格:125mg 英文名稱：Fructose

相關(guān)物質(zhì)D標準品規(guī)格:20mg 英文名稱：Modafinil Related Compound D

乙酰丙suan鈣標準品規(guī)格:1g 英文名稱：Calcium Levulinate (AS)

抗壞血suan鈣標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Calcium Ascorbate

馬來suanjia麥角新標準品規(guī)格:50mg 英文名稱：

異戊巴比CII標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Amobarbital CII

ben妥英標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：

潑尼卡酯相關(guān)物質(zhì)C標準品規(guī)格:20mg 英文名稱：

相關(guān)物質(zhì)D標準品規(guī)格:30mg 英文名稱：

鹽suan烯丙標準品規(guī)格:250mg 英文名稱：Nalorphine Hydrochloride CIII

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