臺盼藍(lán)染色法細(xì)胞活力檢測試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9659

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號
臺盼藍(lán)染色法細(xì)胞活力檢測試劑盒	Typan Blue Staining Cell Viability Assay Kit	100T	FS-X9659

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒各組分均以無菌形式提供，可直接用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。臺盼藍(lán)（Trypan Blue），一種偶氮、親水性酸性藍(lán)色染料，可透過死亡細(xì)胞和垂死細(xì)胞的細(xì)胞膜，將其染成藍(lán)色，而活細(xì)胞由于其細(xì)胞膜的完整性，可將臺盼藍(lán)排斥在外，因此，通過顏色的變化即可將活細(xì)胞（活細(xì)胞呈透明無色）和死細(xì)胞鑒別開來，基于此原理，本品廣泛用于細(xì)胞活性水平的常規(guī)評估。臺盼藍(lán)還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺盼藍(lán)與蛋白結(jié)合形成的復(fù)合物可發(fā)出紅色熒光。另外，臺盼藍(lán)（合適濃度）還常用來淬滅細(xì)胞表面的自熒光或者其他熒光信號。

使用方法

1）對于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，對其充分清洗后，加入適量細(xì)胞重懸液重懸細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液；對于貼壁細(xì)胞，先用消化細(xì)胞，再按照懸浮細(xì)胞的方法制備單細(xì)胞懸液。

2）取0.1ml單細(xì)胞懸液，按照1:1比例與0.1ml 0.4%臺盼藍(lán)染色液充分混勻，室溫染色3~10min。

【注】：因臺盼藍(lán)具有細(xì)胞毒性，染色時間過久會導(dǎo)致部分死細(xì)胞染色，干擾計(jì)數(shù)。通常染色3min即可。

3）取少量上述染色細(xì)胞加入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，于顯微鏡低倍鏡下計(jì)數(shù)，分別計(jì)算著色細(xì)胞（即損傷細(xì)胞和死細(xì)胞）和總細(xì)胞。

【注1】：用移液槍加染色細(xì)胞時，沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其*覆蓋住整個小室。不可過量加液或者不足量。

【注2】：1mm2方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)通常控制在20-50 cells，當(dāng)細(xì)胞數(shù)超過200個，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù)。

4）按照以下公式來計(jì)算細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞百分比，

a，計(jì)算每ml細(xì)胞數(shù)目：Cells/ml=1mm2大方格內(nèi)的平均細(xì)胞數(shù)×稀釋倍數(shù)×104；【注】：此時的稀釋倍數(shù)為：步驟2所取的單細(xì)胞懸液與臺盼藍(lán)染色液混合后的稀釋倍數(shù)

b，總細(xì)胞數(shù)目：Total cells=（Cells/ml）×初制備單細(xì)胞懸液的總體積

c，細(xì)胞活力值：Viability（%）=（總細(xì)胞數(shù)-總著色細(xì)胞數(shù)）/總細(xì)胞數(shù)×100

【注】：通常情況，健康的對數(shù)期培養(yǎng)細(xì)胞，活細(xì)胞至少占到95%。

儲存條件：室溫，有效期2年

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

細(xì)胞周期suK(CCNK)檢測試劑盒 forCyclinK(CCNK)

分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)檢測試劑盒 forSecretograninII(SCG2)

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糖蛋白130(gp130)檢測試劑盒 forGlucoprotein130(gp130)

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因同源物(FOS)檢測試劑盒 forV-FosFBJMurineOsteosarcomaViralOncogeneHomolog(FOS)

白介su17(IL17)檢測試劑盒 forInterleukin17(IL17)

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IgE-Fc受體Ⅰ(FcεRⅠ)檢測試劑盒 forReceptorIForTheFcRegionOfImmunoglobulinE(FceRI)

平滑肌肌動蛋白α2(ACTα2)檢測試劑盒 forActinAlpha2,SmoothMuscle(ACTa2)

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層粘連蛋白β4(LAMβ4)檢測試劑盒 forLamininBeta4(LAMb4)
臺盼藍(lán)染色法細(xì)胞活力檢測試劑盒克拉曲濱相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：Cladribine Related Compound A

克林霉su磷suan酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：Clindamycin Phosphate

西替利嗪相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：

美昔康相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

山梨suan鉀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Potassium Sorbate (AS)

羅布考相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

周效磺an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Sulfadoxine

jia酚曲zuo標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Drometrizole

鹽suan強(qiáng)力霉su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Doxycycline Hyclate

L-巖藻糖標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：L-Fucose (AS)

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的*細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。