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貨號(hào)	FS-X9657

英文名稱：SRB Cell Proliferation and cytotoxicity assay kit

產(chǎn)品規(guī)格：500T

貨號(hào)：FS-X9657

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒是一種常用的比色法檢測細(xì)胞增殖和毒性的試劑盒，其檢測原理：磺酰羅丹明（Sulforhodamine B，SRB）是一種水溶性蛋白染料，能與細(xì)胞內(nèi)蛋白堿性氨基酸結(jié)合形成復(fù)合物，其結(jié)合于細(xì)胞中總蛋白量的多少可以反映細(xì)胞數(shù)的多少。在515nm波長處測得的吸光值與細(xì)胞數(shù)呈良好的線性關(guān)系。

本試劑盒檢測速度快、線性好、操作簡單方便，以96孔板為例，可檢測500次。

使用方法（以96孔板為例）

1）取出細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液；

2）小心加入固定液，每孔100μl，4℃孵育1h，棄去固定液；

3）加入清洗液1，每孔100μl，室溫下靜置30s，棄去清洗液1，重復(fù)該步驟；

4）加入染色液，每孔50μl，室溫下避光孵育15min，棄去染色液；

5）加入清洗液2，每孔100μl，棄去清洗液2（該步驟需快速完成，以免染色漏出胞外），重復(fù)該步驟5-10次，直至把多染料洗盡為止；

6）加入溶解液，每孔100μl，室溫下避光孵育5min；

7）于515nm波長檢測其吸光值。

儲(chǔ)存條件：4℃，有效期1年

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

半胱氨suan蛋白mei抑制劑8(CST8)檢測試劑盒 forCystatin8(CST8)

成纖維細(xì)胞生長因子4(FGF4)檢測試劑盒 forFibroblastGrowthFactor4(FGF4)

絲裂原激活蛋白激mei激mei激mei1(MAP3K1)檢測試劑盒 forMitogenActivatedProteinKinaseKinaseKinase1(MAP3K1)

肌纖蛋白(MYOC)檢測試劑盒 forMyocilin(MYOC)

RNA結(jié)合基元蛋白38(RBM38)檢測試劑盒 forRNABindingMotifProtein38(RBM38)

溶血磷脂?；D(zhuǎn)移mei3(LPCAT3)檢測試劑盒 forLysophosphatidylcholineAcyltransferase3(LPCAT3)

內(nèi)皮型一氧化氮合mei(NOS3)檢測試劑盒 forNitricOxideSynthase3,Endothelial(NOS3)

金屬泛激蛋白1(MPS1)檢測試劑盒 forMetallopanstimulin1(MPS1)

二氫葉suan還原mei(DHFR)檢測試劑盒 forDihydrofolateReductase(DHFR)

精氨suanmei(Arg)檢測試劑盒 forArginase(Arg)

粘膜關(guān)聯(lián)上皮趨化因子(MEC)檢測試劑盒 forMucosaeAssociatedEpitheliaChemokine(MEC)

Notch2氨基端樣蛋白(NOTCH2NL)檢測試劑盒 forNotch2N-TerminalLikeProtein(NOTCH2NL)

多配體蛋白聚糖1(SDC1)檢測試劑盒 forSyndecan1(SDC1)

組氨suan脫羧mei(HDC)檢測試劑盒 forHistidineDecarboxylase(HDC)

90kDa熱休克蛋白β1(HSP90β1)檢測試劑盒 forHeatShockProtein90kDaBeta1(HSP90b1)

白細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子1(LST1)檢測試劑盒 forLeukocyteSpecificTranscript1(LST1)

結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒 forConnectiveTissueGrowthFactor(CTGF)
磺酰羅丹明B(SRB)細(xì)胞增殖和毒性檢測試劑盒聚乙二chun20000標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Polyethylene Glycol 20000

聚乙二chun35000標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Polyethylene Glycol 35000

聚氧化乙烯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Polyethylene Oxide

鹽suan多星標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Doxorubicin Hydrochloride

四丁酚chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:600mg 英文名稱：Tyloxapol

相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:10mg 英文名稱：

羥基乙叉二膦suan標(biāo)準(zhǔn)品（HEDP）規(guī)格:1g 英文名稱：Etidronic Acid Monohydrate

lv化芐乙氧an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Methylbenzethonium Chloride

丙suanlv倍他索標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Clobetasol Propionate

鹽suanjia基多巴酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Methyldopate Hydrochloride