PFK磷酸果糖激酶檢測(cè)試劑盒微量法-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-01S63491

商品介紹：

測(cè)定意義

PFK（EC 2.7.1.11）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，負(fù)責(zé)將果糖-6-磷酸和ATP轉(zhuǎn)化為果糖-1,6二磷酸和ADP，是糖酵解過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶之一。

測(cè)定原理

PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測(cè)定NADH下降速率，即可反映PFK活性。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。

公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒，質(zhì)量信得過產(chǎn)品，售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位，竭誠為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

產(chǎn)品名稱：PFK磷酸果糖激酶檢測(cè)試劑盒微量法

規(guī)格：100管/96樣

檢測(cè)方法：微量法

貨號(hào)：FS-01S63491
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操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

粗酶液提取：

1、細(xì)胞或組織樣品的制備：

培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

綿羊原纖維蛋白2(FBN2)聯(lián)免疫試劑盒長枝木霉Mouse CA15-3 (Carbohydrate Antigen 15-3) ELISA Kit

綿羊胞漿型磷脂A2(cPLA2)聯(lián)免疫試劑盒副短短芽孢桿Mouse MMP-1 (Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit

綿羊半乳糖6硫酯(Gal-6S)聯(lián)免疫試劑盒栗色渾圓鏈霉Mouse MMP-2 (Matrix Metalloproteinase 2) ELISA Kit

綿羊血管活性腸肽(VIP)聯(lián)免疫試劑盒茶色銀耳Mouse MMP-17 (Matrix Metalloproteinase 17) ELISA Kit

綿羊磷脂A2受體1(PLA2R1)聯(lián)免疫試劑盒靈芝Mouse MMP-24 (Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit

綿羊球蛋白G1(IgG1)聯(lián)免疫試劑盒產(chǎn)氣莢膜梭 C型Mouse MMP-7 (Matrix Metalloproteinase 7) ELISA Kit

綿羊色P450家族成員1A2(CYP1A2)聯(lián)免疫試劑盒糞腸球Mouse MMP-8 (Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit

綿羊載脂蛋白C1(ApoC1)聯(lián)免疫試劑盒炭黑曲霉Mouse FFA (Free Fatty Acid) ELISA Kit

綿羊蛋白17(Sp17)聯(lián)免疫試劑盒釀酒酵母Mouse MT (Melatonin) ELISA Kit

綿羊γ谷酰半胱合成(γ-ECS)聯(lián)免疫試劑盒黑曲霉Mouse mIgA (membrane IgA) ELISA Kit

綿羊生存(Surv)聯(lián)免疫試劑盒三葉草根瘤Mouse MHB (Methemoglobin) ELISA Kit

綿羊NOD樣受體(NLR)聯(lián)免疫試劑盒深紅酵母Mouse Methylase ELISA Kit 　

綿羊唾液(SA)聯(lián)免疫試劑盒褐囊蜜環(huán)Mouse MAU (Microalbuminuria) ELISA Kit

綿羊蕈型乙酰膽受體亞型M2(M-AChRM2)聯(lián)免疫試劑盒秦氏蜜環(huán)Mouse MAO (Monoamine Oxidase) ELISA Kit

綿羊神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)聯(lián)免疫試劑盒硬水黃桿Mouse MCP-2 (Monocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit
PFK磷酸果糖激酶檢測(cè)試劑盒微量法小鼠CD30分子Anti-NKx2.2 Antibody 人前膠原C端肽（PCP）elisa定量檢測(cè)試劑盒

小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類Anti-NKX3-1 Antibody人B-Raf原癌基因絲/蘇蛋白激（BRAF）elisa定量檢測(cè)試劑盒

人巨噬移動(dòng)抑制因子Anti-NKX2-8 Antibody人N-甲基-D-天氡離子能谷受體1（GRIN1）elisa定量檢測(cè)試劑盒

大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體Anti-NKX6-3 Antibody人趨化因子（Lptn/XCL1）elisa定量檢測(cè)試劑盒

人組織因子途徑抑制物Anti-NLRX1 Antibody人乙酰A（A-CoA）elisa定量檢測(cè)試劑盒

小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體Anti-NKX6-3 Antibody人破骨相關(guān)受體（OSCAR）elisa定量檢測(cè)試劑盒

大鼠性磷Anti-NLE1 Antibody人葡萄糖-6-磷脫氫（G6PD）elisa定量檢測(cè)試劑盒

人干擾誘導(dǎo)蛋白10Anti-NMBR Antibody人白介7受體（IL7R）elisa定量檢測(cè)試劑盒