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貨號	FS-X9597

產(chǎn)品介紹:

溴脫氧尿苷(5-溴代-2'-脫氧尿苷, BrdU) 是一種合成的核苷酸即胸苷的類似物。BrdU 通常被用于檢測活組織中再生的細(xì)胞。BrdU 可以摻合到復(fù)制細(xì)胞中新的合成DNA 中（在細(xì)胞周期S 期），在DNA 復(fù)制可代替胸苷。利用抗BrdU 的特異性抗體便可以用于檢測這個插入的化學(xué)品，從而檢測出細(xì)胞是否在復(fù)制其DNA。本試劑盒細(xì)胞增殖檢測通過檢測BrdU 的摻合程度，監(jiān)測細(xì)胞健康程度，估量DNA 合成從而監(jiān)測細(xì)胞分裂。

中文名稱：Brdu細(xì)胞增殖檢測試劑盒(IHC法)

英文名稱：BrdU cell proliferation Detection Kit(IHC)

產(chǎn)品規(guī)格：50T

貨號：FS-X9597

實(shí)驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

Misato同源物1(MSTO1)檢測試劑盒 forMisatoHomolog1(MSTO1)

帕金森氏病蛋白2(PARK2)檢測試劑盒 forParkinsonDiseaseProtein2(PARK2)

能受體α1A(ADRα1A)檢測試劑盒 forAdrenergicReceptorAlpha1A(ADRa1A)

RhoGDP解離抑制因子α(ARHGDIα)檢測試劑盒 forRhoGDPDissociationInhibitorAlpha(ARHGDIa)

免疫球蛋白G(IgG)檢測試劑盒 forImmunoglobulinG(IgG)

Rab親和蛋白3A(RPH3A)檢測試劑盒 forRabphilin3A(RPH3A)

叢狀蛋白A3(PLXNA3)檢測試劑盒 forPlexinA3(PLXNA3)

促性腺激su釋放激su(GnRH)檢測試劑盒 forGonadotropinReleasingHormone(GnRH)

白介su1β(IL1β)檢測試劑盒 forInterleukin1Beta(IL1b)

生長分化因子5(GDF5)檢測試劑盒 forGrowthDifferentiationFactor5(GDF5)

野鼠色基因相關(guān)蛋白(AGRP)檢測試劑盒 forAgoutiRelatedProtein(AGRP)

細(xì)胞間粘附分子3(ICAM3)檢測試劑盒 forIntercellularAdhesionMolecule3(ICAM3)

成纖維細(xì)胞生長因子受體3(FGFR3)檢測試劑盒 forFibroblastGrowthFactorReceptor3(FGFR3)

shi黃chun脫氫mei5(RDH5)檢測試劑盒 forRetinolDehydrogenase5(RDH5)

N-去乙?；痬ei/磺基轉(zhuǎn)移mei2(NDST2)檢測試劑盒 forN-Deacetylase/N-Sulfotransferase2(NDST2)

血小板反應(yīng)蛋白(THBS1)檢測試劑盒 forThrombospondin1(THBS1)

組織因子(TF)檢測試劑盒 forTissueFactor(TF)
Brdu細(xì)胞增殖檢測試劑盒(IHC法)鹽suan咪達(dá)zuo侖標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：

咪達(dá)zuo侖標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:300mg 英文名稱：Midazolam CIV

磺an喹喔啉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Sulfaquinoxaline

馬來suan吡拉明標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Pyrilamine Maleate

葉suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：

阿昔韋標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:300mg 英文名稱：Acyclovir

二類殘留溶劑-jia氧丁基tong標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1.2ml×3ampules 英文名稱：

間氨基ben酚標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:300mg 英文名稱：m-Aminophenol

mi索前列chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Misoprostol

lv貝標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Bethanechol Chloride

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