CFDA,SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測(cè)試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9591

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號(hào)
CFDA,SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測(cè)試劑盒	CFSE Cell Proliferation and Tracking Kit	1000T	FS-X9591

產(chǎn)品介紹：

CFSE細(xì)胞增殖與示蹤檢測(cè)試劑盒是基于一種新型熒光探針CFDA SE的用于細(xì)胞增殖檢測(cè)和細(xì)胞熒光示蹤的檢測(cè)試劑盒。CFDA SE目前被廣泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine摻入等其它細(xì)胞增殖檢測(cè)方法。

基于CFDA SE熒光標(biāo)記的細(xì)胞增殖檢測(cè)和[3H]-thymidine摻入、BrdU標(biāo)記獲得的檢測(cè)結(jié)果*一致，但同時(shí)可以提供更多的細(xì)胞增殖信息。使用CFDA SE檢測(cè)可以提供整個(gè)細(xì)胞群中有多少比例的細(xì)胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時(shí)如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細(xì)胞的其它相關(guān)信息。

CFDA SE 的全稱為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，分子式為C29H19NO11，分子量為557.47。CFDA SE可以通透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時(shí)，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)個(gè)月。CFSE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均勻。

由于CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會(huì)減弱一半，這樣通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)就可以檢測(cè)出沒有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(1/2的熒光強(qiáng)度)，分離兩次的細(xì)胞(1/4的熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8的熒光強(qiáng)度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。

CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)。常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測(cè)，甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性，則測(cè)定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè)，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165(VEGF165)檢測(cè)試劑盒 forVascularEndothelialGrowthFactor165(VEGF165)

突觸融合蛋白17(STX17)檢測(cè)試劑盒 forSyntaxin17(STX17)

蛋白激meiBγ(PKBγ)檢測(cè)試劑盒 forProteinKinaseBGamma(PKBg)

腎損傷分子1(Kim1)檢測(cè)試劑盒 forKidneyInjuryMolecule1(Kim1)

基質(zhì)金屬蛋白mei13(MMP13)檢測(cè)試劑盒 forMatrixMetalloproteinase13(MMP13)

肌糖δ(SGCδ)檢測(cè)試劑盒 forSarcoglycanDelta(SGCd)

亮氨suan豐富α2-糖蛋白1(LRG1)檢測(cè)試劑盒 forLeucineRichAlpha-2-Glycoprotein1(LRG1)

叉頭框蛋白O1(FOXO1)檢測(cè)試劑盒 forForkheadBoxProteinO1(FOXO1)

TATA框結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)因子2(TAF2)檢測(cè)試劑盒 forTATABoxBindingProteinAssociatedFactor2(TAF2)

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGFα)檢測(cè)試劑盒 forTransformingGrowthFactorAlpha(TGFa)

肝配蛋白A4(EFNA4)檢測(cè)試劑盒 forEphrinA4(EFNA4)

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)檢測(cè)試劑盒 forTransformingGrowthFactorBeta2(TGFb2)

胰島su樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)檢測(cè)試劑盒 forInsulinLikeGrowthFactorBindingProtein4(IGFBP4)

羧肽meiA3(CPA3)檢測(cè)試劑盒 forCarboxypeptidaseA3,MastCell(CPA3)

硒磷suan合成mei1(SEPHS1)檢測(cè)試劑盒 forSelenophosphateSynthetase1(SEPHS1)

C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測(cè)試劑盒 forCReactiveProtein(CRP)

溶質(zhì)載體家族30成員7(SLC30A7)檢測(cè)試劑盒 forSoluteCarrierFamily30Member7(SLC30A7)
CFDA,SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測(cè)試劑盒噻康zuo相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Tioconazole Related Compound A

乙酰半胱氨suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Acetylcysteine

jia芬那suanjia芬那suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Mefenamic Acid

來fumi特相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:10mg 英文名稱：

糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Saccharin Sodium

土霉su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Oxytetracycline

沙利鉑相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：

鹽suan阿的平標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Quinacrine Hydrochloride

槲皮su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Quercetin

鹽suan普魯卡因an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Procainamide Hydrochloride