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貨號(hào)	FS-X9692

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Hoechst33342染色試劑盒

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號(hào)：FS-X9692

產(chǎn)品介紹:

Hoechst33342染色試劑盒可用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，也可用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色，染色后可用熒光顯微鏡檢測(cè)或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst33342 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33342 能少許進(jìn)入正常細(xì)胞膜，使其染上低藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的膜通透性增強(qiáng)，因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst 33342 比正常細(xì)胞的多，熒光強(qiáng)度要比正常細(xì)胞中要高，此外，凋亡細(xì)胞的染色體DNA的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA 結(jié)合，并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst 33342 排出到細(xì)胞外使之在細(xì)胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細(xì)胞的藍(lán)色熒光增強(qiáng)。Hoechst 33342的大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm；Hoechst 33342和雙鏈DNA 結(jié)合后，大激發(fā)波長(zhǎng)為350nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。

本Hoechst 33342染色試劑盒可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色，也可用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。

儲(chǔ)存條件：HO33342液-20℃避光保存。B液2-8℃保存。

有效期：一年。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

三碘狀腺原(T3)英文名：T3 二磷腺苷核糖基轉(zhuǎn)移4抗體包裝100g

乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)英文名：LF/LTF AKIRIN2蛋白抗體包裝25g

乳脫氫(LDH)英文名：LDH ADP核糖基化樣因子8B抗體包裝5g

溶菌(LZM)英文名：LZM 三磷腺苷家族蛋白2抗體包裝1g

絨毛膜促性腺激β(β-CG)英文名：β-CG AKIRIN1蛋白抗體包裝5g

絨毛膜促性腺激(CG)英文名：CG 錨定蛋白樣蛋白1抗體包裝1g

妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)英文名：PAPP-A 腺苷激2抗體包裝5g

熱休克因子1(HSF1)英文名：HSF1 頂體前體蛋白抗體包裝1g

熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)英文名：HSP gp96 黑色瘤缺失樣蛋白1抗體包裝5g

熱休克蛋白90(HSP-90)英文名：HSP-90 未知糖基化轉(zhuǎn)移AER61抗體包裝100g

熱休克蛋白70(HSP-70)英文名：HSP-70 鐵蛋白Fe65抗體包裝25g

熱休克蛋白60(Hsp-60)英文名：Hsp-60 抑癌基因ras同源家族1抗體包裝5g

熱休克蛋白40(Hsp-40)英文名：Hsp-40 轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體包裝100g

熱休克蛋白27(HSP-27)英文名：HSP-27 心鈉抗體包裝25g

熱休克蛋白20(Hsp-20)英文名：Hsp-20 酰tRNA合成2抗體包裝1g

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體纖維蛋白原(FG)BIX02188 是一種有效的選擇性 MEK5 抑制劑，IC50 為 4.3 nM。 BIX02188 也選擇性抑制 ERK5 活性, IC50 為 810 n
Hoechst33342染色試劑盒滑假絲酵母 3-氨基-5-苯基吡唑白介1

盤長(zhǎng)孢狀盤孢苯基膦酸白介11

中國(guó)臺(tái)灣假黃單胞對(duì)甲?；柞グ捉?2

小孢鏈霉 2-苯基-1,3-白介12

磚紅鐮刀三羥甲基烷三烯酸酯白介12

大腸埃希 5-降烯-2-羧酸叔丁酯白介12;23 p40

根瘤烷磺酸吡啶鹽白介12 p40

芹側(cè)耳（杏鮑菇） 2,8-喹啉二白介15

海神魯杰氏基乙酸酐白介16

芽孢桿屬 4-異氧基苯酸白介17

類銀白紫絲膜 3-三氟甲氧基苯白介17A

釀酒酵母間三氟酮白介17B

球孢白僵根皮苷白介17C

Pseudomonas plecoglossicida 尼泊金異丁酯白介17D

海棗曲霉 6,11-二氫二苯并[b,e]硫雜卓-11-酮白介17F
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)