細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9688

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號(hào)：FS-X9688

產(chǎn)品介紹:

細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒是通過檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性來檢測(cè)細(xì)胞的存活率。通常情況下細(xì)胞膜喪失即可認(rèn)為細(xì)胞研究死亡，本試劑盒中染料不能使正常健康保持完整細(xì)胞膜的細(xì)胞染色，而可以使細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞染色，通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù)拍照后計(jì)數(shù)，就可以對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行精確的定量。

儲(chǔ)存條件：2-8℃避光保存。

有效期：一年。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

髓過氧化物特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)英文名：MPO-ANCA IgG ADP核糖基化樣因子ARL3抗體包裝25g

髓過氧化物特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(MPO-ANCA)英文名：MPO-ANCA 花生四烯15脂氧合1抗體包裝5g

髓過氧化物(MPO)英文名：MPO 癌增強(qiáng)蛋白2抗體包裝1g

性磷(ACP)英文名：ACP α1微球蛋白抗體包裝100g

性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF/FGF-1)英文名：aFGF/FGF-1 α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體包裝25g

性β葡萄糖苷(GBA)英文名：GBA 腺苷A2b受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子1受體抗體包裝1mg

絲裂原激活的蛋白激/MAP激(Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1)英文名：Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1 AMPK的相關(guān)蛋白激5抗體包裝1g

絲轉(zhuǎn)肽抑制劑Kazal type 3(SPINK3)英文名：SPINK3 致瘤磷蛋白32相關(guān)蛋白1抗體包裝25g

絲/蘇蛋白磷(STK)英文名：STK 腺苷脫抗體包裝5g

通道蛋白9(AQP-9)英文名：AQP-9 含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族4抗體包裝1g

通道蛋白5(AQP-5)英文名：AQP-5 ATRNL1蛋白抗體包裝25g

通道蛋白4(AQP-4)英文名：AQP-4 AFP4a蛋白抗體包裝5g

通道蛋白3(AQP-3)英文名：AQP-3 鐵蛋白Fe65樣蛋白1抗體包裝250mg

通道蛋白2(AQP-2)英文名：AQP-2 鐵蛋白Fe65樣蛋白2抗體包裝25g

通道蛋白1(AQP-1)英文名：AQP-1 β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體包裝5g

ANKLE2蛋白抗體糖抗原19-9(CA19-9)Otenabant (CP945598)鹽鹽是CB1受體高親和性拮抗劑，Ki為0.7 nM。
細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒鏈格孢 2,6-二氟苯甲酰β2微球蛋白

更新世肉桿 5-苯基-1H-四氮唑β2整合

巨大芽胞桿 5-氟-2-甲氧基苯酸β氨基己糖苷A

杏鮑菇雙(乙酰酮基)二異基鈦酸酯β半乳糖苷

鮮綠青霉 4-丁基β淀粉

芽孢桿 2，4，5，6-四嘧啶β淀粉樣蛋白1-40

血紅紅曲正基酸β淀粉樣蛋白1-42

乳桿屬基化亞砜β-防御

蘇云金芽孢桿肯尼亞亞種 8-溴辛酸β-防御1

水稻漢納酵母 3-溴-5-氟β-防御2

球形賴氨酸芽孢桿 4,4'-二氨基二環(huán)己烷β-防御3

Aureimonas pseudogalii 5-溴β干擾

大腸埃希氏 2-苯氧基乙β痕跡蛋白

香菇 1-甲基-2-苯基-3-甲β-聯(lián)蛋白

果生假絲酵母 2-溴-3-三氟β-內(nèi)啡肽

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