JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9686

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：20T|50T|100T

貨號：FS-X9686

產(chǎn)品介紹:

線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個標(biāo)志性事件。JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想熒光探針?？梢詸z測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)中，形成聚合物，488nm 激發(fā)時的大發(fā)射波長為590nm，可以產(chǎn)生紅色熒光，在流式圖上表現(xiàn)為FL1和FL2雙陽性；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時JC-1為單體，488nm 激發(fā)時大發(fā)射波長為527nm，可以產(chǎn)生綠色熒光，形成流式圖中所有細(xì)胞FL1均為陽性。凋亡細(xì)胞則大多為FL1 單陽性。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。

通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細(xì)胞膜電位的下降，同時也可以用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個檢測指標(biāo)。

線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)可以快速靈敏地檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位變化，可以用于早期的細(xì)胞凋亡檢測。試劑盒染料與其他的陽離子染料如DiOC6(3)和羅丹明123 相比，特異性更高，對線粒體膜電位變化的特異性高于質(zhì)膜電位變化，對線粒體去極化檢測的檢測一致性更好；紅綠色熒光強(qiáng)度比率只受線粒體膜電位的變化，不受線粒體大小，形狀，密度的差異干擾；檢測靈敏度強(qiáng)，對細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)的微小異質(zhì)性都能辨別；

儲存條件：JC-1-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。孵育緩沖液2-8℃保存。

有效期：一年。

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

同型半胱(Hcy)英文名：Hcy 磷化腺苷單磷活化蛋白激α1抗體包裝1g

鐵調(diào)(Hepc)英文名：Hepc 雙調(diào)蛋白（結(jié)腸直腸源性生長因子）抗體包裝250mg

鐵蛋白(Ferritin)英文名：Ferritin 磷化通道蛋白2抗體包裝100g

鐵蛋白(FE)英文名：FE 粘附相關(guān)激抗體包裝25g

天門冬基轉(zhuǎn)移(AST)英文名：AST 磷化粘附相關(guān)激抗體包裝5g

天冬基轉(zhuǎn)移(AST)英文名：AST 磷化蛋白激B抗體包裝1g

糖原磷化同工MM(GP-MM)英文名：GP-MM 磷化通道蛋白2抗體包裝5g

糖原磷化同工II(GP-II)英文名：GP-II 磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝1g

糖原磷化同工BB(GP-BB)英文名：GP-BB 磷化蛋白激B抗體包裝1g

糖原合成激(GSK)英文名：GSK 磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝5g

糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)英文名：CDT 磷化活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體包裝1g

糖皮質(zhì)類固受體(GR)英文名：GR 磷化雄激受體抗體包裝5g

糖皮質(zhì)激受體β(GR-β)英文名：GR-β 磷化雄激受體抗體包裝5mg

糖皮質(zhì)激受體α(GR-α)英文名：GR-α 磷化蛋白激AKT1,2,3抗體包裝1g

糖類抗原199(CA199)英文名：CA199 磷化蛋白激B抗體包裝1g

ANGEL1蛋白抗體胎蛋白(αFP)Ponatinib是一種有效的，可口服的多靶點(diǎn)激抑制劑，抑制Abl，PDGFRα，VEGFR2，F(xiàn)GFR1 和 Src 的 IC50 分別為0.37 nM，
JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒金龜子綠僵四苯基化鏻α;β干擾受體

牛型放線 2-氨基-4-代苯并噻唑α1抗胰蛋白

假桄榔葉點(diǎn)霉 3-氨基-3-(4-)酸α1酸性糖蛋白

厚壁芽孢桿 2-氟苯酸α1-微球蛋白

蘇云金芽胞桿蠟螟亞種 4,4'-(2-甲基-6-乙基苯)α2-HS糖蛋白

哈茨木霉磺二甲基嘧啶鈉鹽α2巨球蛋白

釀酒酵母 1-溴-2-乙基苯α2抗纖溶

豌豆根瘤 2,4-二αL巖藻糖苷

斑玉蕈 2-溴苯基乙α-N-乙酰-半乳糖氨

地霉半乳糖酵母芐磺酰α-氨基羥甲基惡唑酸

粘著劍 1-溴-2，6-二苯α淀粉

Acinetobacter genospecies 2-氟-3-甲基-5-硝基吡啶α-防御

膠孢三(三溴新戊基)磷酸酯α-輔肌動蛋白4

紅球 D-(+)-二對甲氧基苯甲酰α甘露糖苷

松針散斑殼 2--5-α干擾
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)