細胞有絲分裂指數(shù)分析試劑盒-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9618

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：細胞有絲分裂指數(shù)分析試劑盒

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號：FS-X9618

產(chǎn)品介紹:

有絲分裂，又稱為間接分裂，由W. Fleming (1882)年發(fā)現(xiàn)于動物及E. Strasburger 發(fā)現(xiàn)于植物。特點是有紡錘體染色體出現(xiàn)，子染色體被平均分配到子細胞，這種分裂方式普遍見于高等動植物（動物和高等植物）。有絲分裂是真核細胞分裂產(chǎn)生體細胞的過程。

有絲分裂指數(shù)是用來表示細胞倍增速度的指數(shù)。它可以反映在給定時刻進入有絲分裂的細胞占所有細胞的比例（%）。

組蛋白是真核生物中呈強堿性的蛋白。組蛋白可以被乙?；?、磷酸化、甲基化和泛素化修飾。這些修飾會改變?nèi)旧|(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，從而在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控、染色體裝配等過程中起重要作用。Histone H3 的Ser10，Ser28 和Thr11 都會發(fā)生磷酸化修飾。Histone H3 的這些磷酸化和有絲分裂或減數(shù)分裂過程中的染色質(zhì)濃縮密切相關(guān)。

我司有絲分裂指數(shù)試劑盒通過熒光標記磷酸化Ser28 位點的H3 組蛋白，標記進入有絲分裂M 期的細胞，搭配核酸熒光染料，從而計算這些陽性細胞在總細胞數(shù)中的占比。本試劑盒適用于熒光顯微鏡和高內(nèi)涵分析。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

RalA結(jié)合蛋白1(RALBP1)檢測試劑盒 forRalABindingProtein1(RALBP1)

著絲粒蛋白32(CENP32)檢測試劑盒 forCentromereProtein32(CENP32)

淋巴細胞趨化因子(Lptn)檢測試劑盒 forLymphotactin(Lptn)

干擾suα5(IFNα5)檢測試劑盒 forInterferonAlpha5(IFNa5)

激肽釋放mei5(KLK5)檢測試劑盒 forKallikrein5(KLK5)

硬骨su(SOST)檢測試劑盒 forSclerostin(SOST)

腺A2b受體(ADORA2b)檢測試劑盒 forAdenosineA2bReceptor(ADORA2b)

羧肽meiD(CPD)檢測試劑盒 forCarboxypeptidaseD(CPD)

囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)檢測試劑盒 forCysticFibrosisTransmembraneConductanceRegulator(CFTR)

神經(jīng)源su3(NEUROG3)檢測試劑盒 forNeurogenin3(NEUROG3)

神經(jīng)連接蛋白2(NLGN2)檢測試劑盒 forNeuroligin2(NLGN2)

M2-型suan激mei(PKM2)檢測試劑盒 forPyruvateKinase,Muscle(PKM2)

白介su8(IL8)檢測試劑盒 forInterleukin8(IL8)

白介su10(IL10)檢測試劑盒 forInterleukin10(IL10)

肌微管su相關(guān)蛋白9(MTMR9)檢測試劑盒 forMyotubularinRelatedProtein9(MTMR9)

二jia基精氨suan二水解mei2(DDAH2)檢測試劑盒 forDimethylarginineDimethylaminohydrolase2(DDAH2)

N-jia基-D-天氡氨suan離子能谷氨suan受體2B(GRIN2B)檢測試劑盒 forGlutamateReceptor,Ionotropic,N-Methyl-D-Aspartate2B(GRIN2B)
細胞有絲分裂指數(shù)分析試劑盒lv琥珀酰單標準品規(guī)格:150mg 英文名稱：Succinylmonocholine Chloride

染料木標準品規(guī)格:30mg 英文名稱：Genistin

fu哌啶chun標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Haloperidol

lv化花青su標準品規(guī)格:25mg 英文名稱：Cyanidin Chloride

紅霉suB標準品規(guī)格:100mg 英文名稱：Erythromycin B

利na孕chun標準品規(guī)格:20mg 英文名稱：Lynestrenol

lv噻tong相關(guān)物質(zhì)A標準品規(guī)格:10mg 英文名稱：

醋suan標準品規(guī)格:50mg 英文名稱：Gonadorelin Acetate

標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Trichlorfon

青霉an標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Penicillamine
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)