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貨號(hào)	FS-X9709

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：MTS細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒

英文名稱(chēng)：

產(chǎn)品規(guī)格：250T|500T|1000T

貨號(hào)：FS-X9709

產(chǎn)品介紹:

MTS細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用新型的水溶性甲臢化合物[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(金翁)，內(nèi)鹽；MTS]快速高靈敏度檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的比色檢測(cè)產(chǎn)品。

MTS被細(xì)胞生物還原成一種可溶于組織培養(yǎng)基的甲臢化合物，新陳代謝活躍的活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶類(lèi)將MTS轉(zhuǎn)化成液態(tài)可溶的甲臢化合物，這種甲臢化合物在490nm的吸收值可以直接在96孔板上測(cè)量，而不需要另外作處理。由490nm測(cè)量的吸收值所表示的甲臢產(chǎn)物的數(shù)量與培養(yǎng)物中活性細(xì)胞的數(shù)量成正比。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)量呈線性關(guān)系。

MTS溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中，不需要預(yù)配各種成分，MTS溶液很穩(wěn)定，對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，可以長(zhǎng)時(shí)間孵育細(xì)胞。MTS法測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的靈敏度高，無(wú)放射性，檢測(cè)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它方法如MTT,XTT和WST-1高。

儲(chǔ)存條件：2-8℃避光保存。長(zhǎng)期不用的分裝后于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

有效期：一年。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

基質(zhì)金屬蛋白3(MMP-3)英文名：MMP-3 丁酰基合成3抗體包裝5g

基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)英文名：MMP-2/Gelatinase A 脂肪源性亮基肽抗體（血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)蛋白）包裝1g

基質(zhì)金屬蛋白13(MMP-13)英文名：MMP-13 線粒體凋亡誘導(dǎo)因子2抗體包裝250mg

基質(zhì)金屬蛋白10(MMP-10)英文名：MMP-10 ABL2蛋白抗體包裝1g

基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)英文名：MMP-1 血管緊張轉(zhuǎn)換ACE1抗體包裝5g

基質(zhì)γ羧基谷蛋白(MGP)英文名：MGP 血管緊張轉(zhuǎn)換2抗體包裝100ml

肌激同工MM(CK-MM)英文名：CK-MM Acinus抗體包裝25ml

肌激同工MB(CK-MB)英文名：CK-MB 醋激1抗體包裝100ml

肌激(CK)英文名：CK 促腎上腺皮質(zhì)激(1-39)抗體包裝25ml

肌生成抑制(MSTN)英文名：MSTN 促腎上腺皮質(zhì)激ACTH(18-39)抗體包裝1g

肌球蛋白重鏈(MHC)英文名：MHC 促腎上腺皮質(zhì)激ACTH (7-23)抗體包裝25g

肌球蛋白(MYS)英文名：MYS 活性依賴(lài)的神經(jīng)保護(hù)肽抗體包裝100g

肌紅蛋白(MYO/MB)英文名：MYO/MB α1性糖蛋白1/類(lèi)粘蛋白1抗體包裝25g

肌酐(Cr)英文名：Cr α1性糖蛋白2抗體（類(lèi)粘蛋白2）包裝1g

肌鈣蛋白T(Tn-T)英文名：Tn-T 磷化通道蛋白2抗體包裝25g

鹽轉(zhuǎn)運(yùn)三磷腺苷抗體血紅結(jié)合蛋白(HPX)Tofacitinib (CP-690550,Tasocitinib) is a novel inhibitor of JAK3 with IC50 of 1
MTS細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒陰溝腸桿（陰溝腸桿陰溝亞種） (6-芐基-6H-吡咯[3,4-B]吡啶-5,7-二酮)富含半胱氨型酸性蛋白

糞腸球乙蟲(chóng)富亮氨α2糖蛋白1

大麗花輪枝孢（棉花黃萎?。?/span> 5-硝基-1H-吡唑-3-羧酸甲酯鈣泵

肺炎克雷伯 4-羥基吖啶鈣離子通道抗體

大腸埃希氏桿 5--3-硝基-2-基吡啶鈣調(diào)；鈣調(diào)蛋白

黑腐皮殼 6-溴喹啉-2-酮鈣調(diào)依賴(lài)性蛋白激2

河北木霉 2-(2-乙酰氨基)-5-硝基-2'-二苯甲酮鈣網(wǎng)蛋白

滑假絲酵母 2-溴-4-甲基-6-氟吡啶鈣衛(wèi)蛋白

香蕉 6-氨基-5-溴甘氨酰脯酸二肽氨基肽

靈芝(紅芝, 赤芝) 2-(1H-吡唑-4-基)乙甘酸-N-甲基轉(zhuǎn)移

泰塔溫沙壤土桿 4-甘露聚糖結(jié)合凝集酸肽-2

中慢生華癸根瘤 1-(4-三氟甲基嘧啶-2-基)哌甘露聚糖結(jié)合凝集相關(guān)絲酸蛋白

肉梭 C型 6-甲氧基-7-芐氧基喹唑啉-4-酮甘露糖結(jié)合蛋白;甘露糖結(jié)合凝集

炭黑曲霉 3-叔丁氧?；s環(huán)庚烷甘露糖受體

芽胞桿 4-乙氧基-3-硝基吡啶甘油-3-磷酸脫氫
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)