Hoechst 33258 DNA染料-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9648

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：10mg

貨號(hào)：FS-X9648

產(chǎn)品介紹:

Hoechst 33258 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33258 常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，也可以用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期12個(gè)月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

mei12(CA-12)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CA-12 ELISA Kit，CA-12，

嗜suan性白血球相關(guān)之RNA水解酵su家族成員1(EAR1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：EAR1 ELISA Kit，EAR1，

松弛肽/松弛su(RLN)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：RLN ELISA Kit，RLN，

神經(jīng)型一氧化氮合成mei(nNOS)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：nNOS ELISA Kit，nNOS，

色su上皮衍生因子(PEDF)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PEDF ELISA Kit，PEDF，

熱休克蛋白27(HSP-27)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：HSP-27 ELISA Kit，HSP-27，

橋粒芯糖蛋白3(Dsg-3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Dsg-3 ELISA Kit，Dsg-3，

葡萄糖6磷suan脫氫mei(G6PD)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：G6PD ELISA Kit，G6PD，

Ⅲ(FⅢ)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：FⅢ ELISA Kit，F(xiàn)Ⅲ，

內(nèi)臟脂肪特異性絲氨suan蛋白mei抑制劑(vaspin)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：vaspin ELISA Kit，vaspin，

膜輔蛋白(MCP/CD46)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MCP/CD46 ELISA Kit，MCP/CD46，

重組激活基因1(RAG-1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：RAG-1 ELISA Kit，RAG-1，

粘蛋白/粘液su7(MUC7)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MUC7 ELISA Kit，MUC7，

中期因子(MK)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MK ELISA Kit，MK，

游離jia狀腺su(FT4)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：FT4 ELISA Kit，F(xiàn)T4，

乙酰輔meiA羧化mei合成mei(ACC)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ACC ELISA Kit，ACC，

胰島su降解mei(IDE)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：IDE ELISA Kit，IDE，
Hoechst 33258 DNA染料鹽suanbenjia嗪標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cyclizine Hydrochloride

維Asuan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:30mg×5vials 英文名稱：

丹曲林相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

亞麻suanjia酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:5×50mg 英文名稱：Methyl Linolenate

依莰舒相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Ecamsule Related Compound B

葡萄糖suan鉀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Potassium Gluconate

jia氧標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Methoxsalen

鹽suan哌jia酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:125mg 英文名稱：

西平標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：

碳suan氫鉀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Potassium Bicarbonate (AS)

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