Caspase 6抑制劑-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9704

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：200μl

貨號(hào)：FS-X9704

產(chǎn)品介紹:

Z-VEID-FMK是一種高效可逆的caspase-6的小分子抑制劑?？梢砸种朴蒀aspase 6激活導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。Z-VEID-FMK分子式為C31H45FN4O10，分子量為652.7。

Z-VEID-FMK采用進(jìn)口高品質(zhì)原料分裝配制，濃度為5mM。本產(chǎn)品適用于需要用到Z-VEID-FMK的各種實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行配制和使用，具體請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)指南。

儲(chǔ)存條件：-20℃保存。

有效期：一年。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)英文名：AECA 載脂蛋白樣蛋白6抗體包裝5g

抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)英文名：ADH/VP/AVP 凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號(hào)抗體包裝100g

抗酒石性磷5b(TRACP-5b)英文名：TRACP-5b A2LD1蛋白抗體包裝25g

抗酒石性磷5b(TRACP5b)英文名：TRACP5b α1,4-N-乙酰葡糖轉(zhuǎn)移α4Gn-T抗體包裝5g

抗酒石性磷(TRACP)英文名：TRACP 芳香乙酰脫乙?；贵w包裝10ml

抗抗體(AsAb)英文名：AsAb 芳香乙酰脫乙?；鶚拥鞍?抗體包裝1g

抗?fàn)钕偾虻鞍卓贵w(ATGA/TGAB)英文名：ATGA/TGAB 基乙二半脫氫磷泛酰巰基乙轉(zhuǎn)移抗體包裝25g

抗?fàn)钕龠^氧化物抗體(TPO-Ab)英文名：TPO-Ab 賴戊二還原抗體包裝5g

抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)英文名：EMA IgA 錨蛋白重復(fù)域6抗體包裝25g

抗環(huán)胍肽抗體(Anti-CCP-antibody)英文名：Anti-CCP-antibody 精2抗體包裝5g

抗紅細(xì)胞抗體(RBC)英文名：RBC 固還原家族1成員C3抗體包裝1g

抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)英文名：gp210 促腎上腺皮質(zhì)激受體包裝5g

抗核抗體(ANA)英文名：ANA 褐黑相關(guān)蛋白ART抗體包裝1g

抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)英文名：ssDNA 腎上腺皮質(zhì)線粒體鐵氧還蛋白抗體包裝250mg

抗單核細(xì)胞抗體(AMA)英文名：AMA Allgrove綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝5g

磷化粘附相關(guān)激抗體促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)Erlotinib Hydrochloride (CP-358774 Hydrochloride) 抑制 EGFR 激的 IC5
Caspase 6抑制劑釀酒酵母 N-十八烷基苯甲酰低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6

潮汐紅色桿 (3S,4S)-3-氨基-4-羥基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯低氧誘導(dǎo)因子-1α

釀酒酵母 3-溴-4-甲氧基苯低氧誘導(dǎo)因子-2α

纖維黃鏈霉間甲苯磺酰抵抗

米川黃桿 2,7-二甲基咔唑凋亡誘導(dǎo)因子

鏈輪枝屬苯基基氫氧化銨(的甲溶液)凋亡相關(guān)因子配體

阪崎腸桿 1-叔丁氧羰基-4-氨基鹽酸鹽丁型肝炎IgG抗體

嗜線蟲賽雷氏六水六氟硅酸鎂蕈堿型乙酰受體亞型M2抗體

蠟?zāi)?/span> 5-溴-2-苯甲蕈堿型乙酰受體亞型M3

小海螺 4,5-二氟鄰苯二甲酸端粒

栗疫病 4,5-二氟鄰苯二甲酸酐端粒逆轉(zhuǎn)錄

肋生鹽弧肋生亞種 1-異基吡唑?qū)ΨQ性二甲基精

教堂小短桿 4-叔丁氧羰基-2-嗎啉甲酸對(duì)氧磷

多產(chǎn)色鏈霉 1-Boc-4-甲基-4-甲酸對(duì)氧磷1

大腸埃希 3,4-二氟水楊酸多巴

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