羅丹明123-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9644

產(chǎn)品介紹:

Rhodamine 123 (羅丹明123, Rh 123)是一種常用的陽離子綠色熒光染料，可以透過細(xì)胞膜從而在活細(xì)胞線粒體內(nèi)聚集，并發(fā)出黃綠色熒光。廣泛用作檢測(cè)線粒體膜電位的熒光探針，并且對(duì)細(xì)胞沒有任何毒性。

：62669-70-9

分子式：C21H17ClN2O3

分子量：380.82

純度：≥98%（HPLC）

使用方法

1. 用載玻片準(zhǔn)備細(xì)胞。細(xì)胞數(shù)目應(yīng)為 5×104～5×105個(gè)/mL。

2. 孵育該載玻片，用 PBS或Hank’s 液洗滌細(xì)胞。

3. 用培養(yǎng)基稀釋 Rh123母液以制備 1～20μM Rh123緩沖液。具體工作濃度取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。

4. 將 Rh123緩沖液加入載玻片并在37℃下孵育 30 分鐘至 1 小時(shí)。

5. 去除 Rh123 緩沖液并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞（洗滌細(xì)胞后為了固定，加入 10%福爾馬林緩沖液并孵育 15～20 分鐘，接著用 PBS洗滌）。

6. 用帶有熒光素濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光,有效期一年

中文名稱：羅丹明123

英文名稱：Rhodamine 123

產(chǎn)品規(guī)格：5mg

貨號(hào)：FS-X9644

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

蛋白激meiN1(PKN1)檢測(cè)試劑盒 forProteinKinaseN1(PKN1)

接觸蛋白3(CNTN3)檢測(cè)試劑盒 forContactin3(CNTN3)

妊娠特異性β1-糖蛋白(PSG1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PSG1 ELISA Kit，PSG1，

橋粒芯糖蛋白3(DSG3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DSG3 ELISA Kit，DSG3，

趨化因子C-C-基元受體2(CCR2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CCR2 ELISA Kit，CCR2，

前列腺蛋白類脂肪meiB(LIPB)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：LIPB ELISA Kit，LIPB，

破骨細(xì)胞刺激因子1(OSF)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：OSF ELISA Kit，OSF，

Ⅴ(F5)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：F5 ELISA Kit，F(xiàn)5，

內(nèi)酰anmeiβ(LACTβ)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：LACTβ ELISA Kit，LACTβ，

鈉/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5(SGLT5)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SGLT5 ELISA Kit，SGLT5，

糜蛋白mei原B2(CTRB2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CTRB2 ELISA Kit，CTRB2，

磷脂酰絲氨suan合mei2(PTDSS2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PTDSS2 ELISA Kit，PTDSS2，

磷suan甘油suan變位mei5(PGAM5)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PGAM5 ELISA Kit，PGAM5，

外核suan焦磷suanmei/磷suan二酯mei6(ENPP6)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ENPP6 ELISA Kit，ENPP6，

突觸囊泡蛋白Ⅱ(SYT2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SYT2 ELISA Kit，SYT2，

脫氧核糖核suanmeiⅠ樣2(DNASE1L2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DNASE1L2 ELISA Kit，DNASE1L2，

?？康鞍?/span>2(DOK2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DOK2 ELISA Kit，DOK2，
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