JC-1熒光探針-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9636

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：1mg

貨號：FS-X9636

產(chǎn)品介紹:

JC-1 用于檢測細(xì)胞的線粒體膜電位時(shí)常用的濃度范圍為 1～20 μg/ml，對于很多細(xì)胞適宜采用的 JC-1濃度為 10 μg/ml。

JC-1 是一種廣泛用于檢測線粒體膜電△Ψm位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內(nèi)，可以用來檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內(nèi)，JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中形成聚合物，聚合物發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失，JC-1只能以單體的形式存在于胞漿中，產(chǎn)生綠色熒光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不僅可用于定性檢測，因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測，因線粒體的去極化程度可以通過紅/綠熒光強(qiáng)度的比例來衡量。觀察時(shí)，只需使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。

：3520-43-2

分子式：C25H27Cl4IN4

分子量：652.23

儲存條件：-20℃，干燥避光，有效期一年

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

蛋白激meiCθ(PKCθ)檢測試劑盒 forProteinKinaseCTheta(PKCq)

神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒 forNeurotrophin3(NT3)

Vav1癌基因(VAV1)檢測試劑盒 forVav1Oncogene(VAV1)

甘露糖結(jié)合凝集su2(LMAN2)檢測試劑盒 forLectin,MannoseBinding2(LMAN2)

重肽鐵蛋白(FTH)檢測試劑盒 forFerritin,HeavyPolypeptide(FTH)

細(xì)胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)檢測試劑盒 forCytokeratinFragmentAntigen21-1(CYFRA21-1)

血小板親和蛋白1(PKP1)檢測試劑盒 forPlakophilin1(PKP1)

骨成型蛋白10(BMP10)檢測試劑盒 forBoneMorphogeneticProtein10(BMP10)

Ⅰ型膠原α2(COL1α2)檢測試劑盒 forCollagenTypeIAlpha2(COL1a2)

低密度脂蛋白(LDL)檢測試劑盒 forLowDensityLipoprotein(LDL)

組織金屬蛋白mei抑制因子1(TIMP1)檢測試劑盒 forTissueInhibitorsOfMetalloproteinase1(TIMP1)

防御suβ116(DEFβ116)檢測試劑盒 forDefensinBeta116(DEFb116)

利鉀尿肽(KP)檢測試劑盒 forKaliureticPeptide(KP)

su(ANLN)檢測試劑盒 forAnillin(ANLN)

基質(zhì)金屬蛋白mei13(MMP13)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase13(MMP13)

分層蛋白(SFN)檢測試劑盒 forStratifin(SFN)

肝X受體α(LXRα)檢測試劑盒 forLiverXReceptorAlpha(LXRa)
JC-1熒光探針去羥mi松標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Desoximetasone

鹽suan三乙烯四an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Trientine Hydrochloride

舒林suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Sulindac

哌西他嗪標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：Piperacetazine

羥萘芐芬寧標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Bephenium Hydroxynaphthoate

鹽suan鹽標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：

lv雷他定相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:15mg 英文名稱：

ben咪丁tong標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:400mg 英文名稱：Climbazole

炔雌chun相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：

酒石suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:150mg 英文名稱：

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