小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞,MA-891細胞原代或傳代提供，高活性、無污染(不含原蟲、霉菌、細菌、黑蛟蟲、真菌、支原體等污染物質(zhì))。生長特性：貼壁、懸浮、半貼壁
傳代時間：2-4天/3-5天
傳代比例：1:2-1:3 1:1-1:2
小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞 , MA-891細胞5×10^5以上/1ml
對于大多數(shù)細胞研究工作者來說，小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞 , MA-891細胞污染那可是個糟糕的事情，也是比較容易出現(xiàn)的情況，我們?nèi)绾畏婪?，如何避免，是我們要學(xué)習(xí)和掌握的。
DTT, 25g 25 g
HK/G6P-DH, 15 mg 15 mg （5 ml）
Histone 10 mg
小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞 , MA-891細胞Expand HiFi PCR System dNTPack 500 U （2 x 250 U）
CHAPS, 10g 10 g
Amyloglucosidase from Aspergil 3,500 U
Chromozym TH 20 mg
NAD, approx. , Grade I, ly 1 g
Agarose Gel DNA Extraction Kit 1 kit （max. 100 reactions）
下面我們對細胞培養(yǎng)中常見的污染情況，做個總結(jié)：
1）原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當(dāng)他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，zui終形成惡性循環(huán)。
2）霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態(tài)變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，*或*或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環(huán)境*消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
3）細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！ 可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
4）黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5）真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
6）支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養(yǎng)，無任何不良反應(yīng)。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細胞），37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（*和氨芐*）。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染、檢測細胞某項指標(biāo)前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結(jié)果。1、孵箱應(yīng)定期用三氧機消毒或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺的風(fēng)機不能過大，風(fēng)機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。
NADH, approx. 98%, 1 g 1 g
Tris-HCl 500 g
Expand HiFi PCR Sys., 100 u 100 U
Trypsin,Sequencing Grade,modif 4 x 25 µg
Phosphoglucose Isomerase （PGI） 10 mg （1 ml）
Agarose LE, 100g 100 g
PCR Nucleotide MixPLUS （200 re 200 µl （2 x 100 µl） （for 200 reactions of 50 µl final reaction volume）
L-LDH, （rabbit muscle）, 10 mg 10 mg （2 ml）
Luciferase from Photinus pyral 1 mg protein
7-Deaza-2'-deoxy-GTP, Di-Li 2 µmol （200 µl）
Taq DNA Polymerase,5 units/Ál 100 U
b-Glucuronidase, 5ml 5 ml
Formate Dehydrogenase, 80 u 80 U
Plasminogen 20 U
Glutathione Reductase （GR）, 5 5 mg （1 ml）
Pwo DNA Polymerase, 100 U 100 U
BSA Fraction V, 100g 100 g
HP PCR Template Preparation Ki 1 kit （100 purifications）
ATP, disodium salt, special qu 1 g
Proteinase K,recomb.,PCR Grd. 5 ml
Poly （A） 100 mg
Water, PCR Grade （1x25ml） 25 ml （1 x 25 ml）
Poly [d（I-C）] 10 A260 units
Chromozym PL 20 mg
Proteinase K,recomb.,PCR Grd.S 25 ml
Streptavidin Magnetic Particle 2 ml
Titan One Tube RT-PCR Kit 50 reactions, including 10 control reactions
FastStart TaqMan Probe Master 2 x 1.25 ml （for 100 reactions of 50 µl final reaction volume）
FastStart Universal Probe Mast 2 x 1.25 ml （for 100 reactions of 50 µl final reaction volume）
G6P-DH, Grade I 5 mg （1 ml）
PCR Core Kit 1 kit （for 100 reactions of 50 µl final reaction volume）
GOT, 2 mg 2 mg （1 ml）
L-LDH, （rabbit muscle）, 25 mg 25 mg （5 ml）
G6P-DH, Leuc. mesenteroides, 1 1,000 U （1 ml）
dITP 25 µmol （250 µl）
QUICK SPIN G-25 RNA （100621） 2 20 columns
QUICK SPIN G-50 RNA（100411） 20 20 columns
Phosphoenolpyruvate, monopotas 1 g
DNA Isolation Kit for Mammalia 1 kit （25 purifications of 10 ml samples）
Poly （A） x （dT）_15 5 A260 units
Poly （dA） 5 A260 units
Creatine Kinase （CK）, 500mg 500 mg
HK/G6P-DH, 30 mg 30 mg （10 ml）
FastStart SYBR Green Master 5 5 ml （4 x 1.25 ml） （for 200 reactions of 50 µl final reaction volume）
