微囊藻毒素檢測試劑盒適用于水中微囊藻毒素的定量檢測。 檢測原理 Auvon?微囊藻毒素檢測試劑盒由可以和微囊藻毒素及微囊藻毒素酶標(biāo)記物結(jié)合的多克隆抗體制成。樣品中的微囊藻毒素與微囊藻毒素酶標(biāo)記物競爭結(jié)合數(shù)量有限的抗體結(jié)點。檢測過程中， 先加入微囊改造毒素酶標(biāo)記物及含有微囊藻毒素的樣品到測試孔中接著加入抗體，酶標(biāo)記物與樣品中的微囊藻毒素競爭結(jié)合同樣的抗體的結(jié)合點。測試孔中包被有抗兔IgG，用于捕獲加入的兔抗微囊藻毒素抗體。孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的分子。每孔中加入干凈的底物溶液，連接的酶結(jié)合物可以將底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色化合物，一個酶分子可以轉(zhuǎn)化多個底物分子。由于各個孔中抗體可結(jié)合位點是相同的，并且加入的微囊藻毒素酶標(biāo)記物的量也是相同的，樣品中微囊藻毒素含量低的則酶標(biāo)記物結(jié)合得多，顏色會顯深藍(lán)色。反之，樣品中微囊藻毒素含量高的則酶標(biāo)記物結(jié)合得少，顏色會顯淺藍(lán)色。注意：顏色與微囊藻毒素的含量成反比。較深的顏色=較低的濃度較淺的顏色=較高的濃度 特性：特異性 Auvon?微囊藻毒素檢測試劑盒沒有區(qū)分微囊藻毒素-LR（作為標(biāo)準(zhǔn)品）及其它類型，然而可以測到微囊藻毒素的其它類型，以下表格中展示的是相關(guān)值及交叉反映率（%CR），以下所有濃度均為ppb級。種類 %CR 微囊藻毒素-LR 100 微囊藻毒素-RR 87 微囊藻毒素-YR 48 Nodularin 31
注意
1． 不用時請將試劑盒儲存于4-8℃。
2． 不可冷凍試劑盒，不可使其暴露在大于37℃環(huán)境中。
3． 開始實驗前，所有試劑達(dá)到室溫。
4． 不可使用過期試劑。
5． 不同批次的試劑不可混用。
6． 使用確證方法確認(rèn)陽性樣品。
試劑盒組成
1． 包被有羊抗兔抗體的的微孔板 （12×8條）
2． 陰性對照品一瓶（0ppb微囊藻毒素-LR）
3． 0.1ppb,0.3ppb,0.8ppb,2ppb微囊藻毒素-LR標(biāo)準(zhǔn)品各一瓶
4． 1.0ppb微囊藻毒素質(zhì)控樣品一瓶
5． 微囊藻毒素HRP酶標(biāo)記物一瓶
6． 兔抗微囊藻毒素抗體溶液一瓶
7． 底物一瓶
8． 停止液一瓶（注意！1N 鹽酸，小心處理）
9． 100×清洗液 需要設(shè)備酶標(biāo)儀薄膜計時器或表蒸餾水或去離子水振蕩器
檢測程序
1． 將所有試劑及樣品置于室溫下。
2． 從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3． 稀釋100倍濃縮清洗液為1倍清洗液，例：取5ml 100倍清洗液到500ml洗瓶中并加入495ml蒸餾水。
4． 吸取50ul酶標(biāo)記物到微孔板的每個孔中。
5． 吸取50ul標(biāo)準(zhǔn)，陰性對照，樣品到對應(yīng)微孔中，必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染。
6． 加入50ul抗體溶液到每個小孔中。
7． 快速震蕩使孔中的溶液混合，并敷上薄膜，或者微孔板可以放在振蕩器上震蕩孵育，從而達(dá)到在孵育期間持續(xù)震蕩的效果。
8． 孵育30分鐘。
9． 孵育完后，去掉封口膜將微孔中的溶液倒入水槽中，用1倍清洗液清洗*充滿微孔，震蕩后倒掉，重復(fù)四次，總共五次洗板。在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干。
10． 每個微孔中加入100ul底物溶液。
11． 蓋上小孔并孵育30分鐘。
12． 按照加底物的順序每孔中加入100ul停止液。停止液為1 N鹽酸，需小心操作。
13． 450nm下讀板，如果酶標(biāo)儀有雙波長，可同時測605或650nm雙波長。
14． 如果酶標(biāo)儀可以處理數(shù)據(jù)，可用半對數(shù)線性或4參數(shù)曲線擬合，如果為手動計算，則可按照以下部分進(jìn)行。
計算結(jié)果
1． 讀板之后，求標(biāo)準(zhǔn)，陰性對照，樣品的平均吸光度值并按以下方法計算%B0: 標(biāo)準(zhǔn)，陰性對照，樣品吸光度值的平均值 %B0 = 陰性對照的平均吸光值
2． 以%B0為Y軸，以微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)濃度的半對數(shù)值為X軸，繪制曲線。 3． 通過每個樣品的B0%，在圖上計算出微囊藻毒素的濃度。
4． 如果樣品B0%在設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)B0%范圍之內(nèi)，就可以得出一個具體的濃度值。如果樣品B0%出了范圍只能說明樣品的濃度大于高濃度的標(biāo)準(zhǔn)或低于低濃度的標(biāo)準(zhǔn)。
