(貨號(hào):WLB8201KIT)
產(chǎn)品名稱(chēng)
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(基礎(chǔ)型)、基礎(chǔ)型DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒
原理概述:
本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù):在常溫恒溫下,重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA,在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下,侵入雙鏈DNA模板;在侵入位點(diǎn)形成D-loop區(qū)域,并開(kāi)始對(duì)DNA雙鏈進(jìn)行掃描;待找到與引物互補(bǔ)的目的區(qū)域后,復(fù)合體Rec/ssDNA解體的同時(shí),聚合酶也結(jié)合到引物的3’末端,開(kāi)始鏈的延伸。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短(僅需30 mins)等優(yōu)點(diǎn),反應(yīng)組分為干粉狀態(tài),操作簡(jiǎn)便,易于保存。使用金屬浴、水浴鍋等即可進(jìn)行反應(yīng)操作,無(wú)需購(gòu)買(mǎi)PCR儀等價(jià)格高昂的設(shè)備。
引物設(shè)計(jì):
建議使用長(zhǎng)度在30-35 bp的引物,引物過(guò)短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度;引物設(shè)計(jì)避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增;擴(kuò)增子長(zhǎng)度建議在150-300 bp,通常不超過(guò)500 bp。
試劑盒組成:
組成 | 含量 |
A buffer | 1.6 mL×1管 |
B buffer | 150 μL×1管 |
正對(duì)照模板 | 30 μL×1管 |
正對(duì)照引物Mix | 60 μL×1管 |
試劑 | 48份 |
使用說(shuō)明書(shū) | 1份 |
試劑盒儲(chǔ)存:
運(yùn)輸條件:低溫運(yùn)輸;
儲(chǔ)存條件:儲(chǔ)存溫度 ≤ -20 oC,避光保存,避免重壓和反復(fù)凍融;
產(chǎn)品有效期:12個(gè)月。
操作步驟:提前30分鐘將試劑盒所需組分取出,室溫融化,震蕩混勻。
1) 每個(gè)干粉反應(yīng)管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需融化混勻,否則會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)效果產(chǎn)生影響);
2) 每個(gè)反應(yīng)管分別加入2 μL上游引物和2 μL下游引物(引物濃度10 μM,對(duì)于多個(gè)反應(yīng)、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應(yīng)管中);
3) 向反應(yīng)管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根據(jù)核酸濃度調(diào)整加入的核酸模板體積,并相應(yīng)調(diào)整加入的ddH2O體積,至模板與ddH2O總體積為14.1 μL);
4) 最后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(請(qǐng)務(wù)必上下顛倒甩動(dòng)反應(yīng)管8-10次進(jìn)行混勻;對(duì)于多個(gè)反應(yīng),建議將B buffer加至反應(yīng)管的蓋子內(nèi)側(cè)上下顛倒后混勻);
5) 混勻后,將反應(yīng)液甩(或快速離心)至管子底部,然后立即將反應(yīng)管放入恒溫設(shè)備中37-39 oC孵育30 mins;
6) 反應(yīng)結(jié)束后,加入50 μL酚/氯仿,1:1抽提反應(yīng)液,12000 rpm離心5 mins,取5 μL上清進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
體系配制
組分 | 體積(μL) |
A buffer | 29.4 |
上游引物(10 μM)* | 2 |
下游引物(10 μM)* | 2 |
ddH2O和DNA模板 | 14.1 |
B buffer | 2.5 |
總體積 | 50 |
*正對(duì)照反應(yīng)單元體系配制:正對(duì)照模板加入2μL,加入4 μL正對(duì)照引物Mix(包含上/下游引物),其他組分參照體系配制。
注意事項(xiàng):
1. 由于試劑盒靈敏度非常高,在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請(qǐng)注意避免核酸污染,并設(shè)置空白對(duì)照;
2. 使用時(shí)請(qǐng)取出實(shí)驗(yàn)所需的MIRA反應(yīng)單元的數(shù)量,剩余部分請(qǐng)置于存儲(chǔ)條件下。