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  • DNA(液體熒光型)恒溫快速擴(kuò)增試劑盒

DNA(液體熒光型)恒溫快速擴(kuò)增試劑盒

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  • 型號(hào)
  • 品牌
  • 所在地北京市
  • 更新時(shí)間2023-08-13
  • 廠商性質(zhì)其他
  • 入駐年限1
  • 實(shí)名認(rèn)證已認(rèn)證
  • 產(chǎn)品數(shù)量92
  • 人氣值153
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北京立博泰業(yè)科技有限公司位于北京市海淀區(qū)中國(guó)農(nóng)大國(guó)際創(chuàng)業(yè)園,是集研發(fā)和科研儀器研發(fā)銷(xiāo)售為-體的高科技專(zhuān)業(yè)公司,由具有多年研發(fā)和企業(yè)運(yùn)營(yíng)經(jīng)驗(yàn)的專(zhuān)業(yè)人士創(chuàng)辦。公司于201 6年被認(rèn)定為企業(yè)和中關(guān)村企業(yè),公司以研發(fā)為己任,多位相教授、博士和碩土組成研發(fā)團(tuán)隊(duì),依托多家國(guó)內(nèi)高校及科研院所,圍繞生命科學(xué)、化工新材料、生物質(zhì)能源、光伏風(fēng)電新能源和環(huán)保技術(shù)以及傳統(tǒng)化工產(chǎn)業(yè)技術(shù)及裝備革新方面開(kāi)展了大量的研發(fā)和推廣工作, 獲得多項(xiàng)國(guó)家, 部分項(xiàng)目已經(jīng)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。"工欲善其事,必先利其器”,公司秉承服務(wù)科研的經(jīng)營(yíng)理念,與眾多國(guó)內(nèi)外優(yōu)秀儀器設(shè)備制造廠商建立了良好的合作關(guān)系,全力協(xié)助國(guó)內(nèi)高校和科研院所量身購(gòu)置所需科學(xué)儀器和試劑耗材,不斷弓|進(jìn)和推薦各領(lǐng)域*儀器和試劑
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(貨號(hào):WLE5003)原理概述:本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù):在常溫恒溫下,重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA,在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下,侵入雙鏈DNA模板
DNA(液體熒光型)恒溫快速擴(kuò)增試劑盒 產(chǎn)品詳情

DNA(液體熒光型)恒溫快速擴(kuò)增試劑盒 (貨號(hào):WLE5003

原理概述:

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù):在常溫恒溫下,重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA,在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下,侵入雙鏈DNA模板;在侵入位點(diǎn)形成D-loop區(qū)域,并開(kāi)始對(duì)DNA雙鏈進(jìn)行掃描;待找到與引物互補(bǔ)的目的區(qū)域后,復(fù)合體Rec/ssDNA解體的同時(shí),聚合酶也結(jié)合到引物的3’末端,開(kāi)始鏈的延伸。本試劑盒在39 oC下,依賴(lài)核酸外切酶的作用,加入根據(jù)模版設(shè)計(jì)的特異的分子探針,使用熒光監(jiān)測(cè)設(shè)備能實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)片段擴(kuò)增過(guò)程的實(shí)時(shí)監(jiān)控。

引物設(shè)計(jì):

建議使用長(zhǎng)度在30-35 bp的引物,引物過(guò)短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度;引物設(shè)計(jì)避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增;擴(kuò)增子長(zhǎng)度建議在150-300 bp,通常不超過(guò)500 bp。

熒光探針設(shè)計(jì):

探針序列不與特異性引物識(shí)別位點(diǎn)重疊,長(zhǎng)度為46-52 nt,序列避免回文序列、內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基。探針共有四個(gè)修飾位點(diǎn):距離5’端的≥35 nt的中部位置標(biāo)記一個(gè)dSpacer(四氫呋喃,THF),作為核酸外切酶的識(shí)別位點(diǎn);THF位點(diǎn)的上游標(biāo)記一個(gè)熒光基團(tuán),下游標(biāo)記一個(gè)粹滅基團(tuán),兩個(gè)基團(tuán)的間距為2-4 nt;THF距離3’末端≥15 nt,并且3’末端標(biāo)記一個(gè)修飾基團(tuán),例如胺基、磷酸基團(tuán)或C3-Spacer。

試劑盒組成:

100T/盒

組成 含量
C buffer 1 mL×2管
L buffer 500 μL×1管
P-core 1.2 mL×1管
E-core 60 μL×1管
B buffer 300 μL×1管
使用說(shuō)明書(shū) 1份

試劑盒儲(chǔ)存:

運(yùn)輸條件:低溫運(yùn)輸;

儲(chǔ)存條件:儲(chǔ)存溫度 ≤ -20 oC,避光保存,避免重壓、反復(fù)凍融;

操作步驟:提前將試劑盒所需組分取出,冰上或低溫下融化(C buffer可室溫融化),震蕩混勻。

1) 向無(wú)菌0.2mL PCR管中加入20 μL C buffer、5 μL L buffer;

2) 加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探針,再加入1.5μL dNTPs(10 mM);

3) 向反應(yīng)管中加入12 μL P-core和0.6 μL E-core,(步驟1~3可以混合后再分裝至反應(yīng)管中);

4) 向反應(yīng)管中加入3.8 μL核酸模板;

5) 最后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(加入B buffer反應(yīng)立即被啟動(dòng));混勻后,將反應(yīng)液甩(或快速離心)至管子底部,然后立即將反應(yīng)管放入熒光檢測(cè)設(shè)備中。熒光檢測(cè)程序設(shè)置為:恒溫39 oC;每30 s采集一次熒光信號(hào);反應(yīng)時(shí)間20 mins。

注:如使用ABI系列PCR儀,請(qǐng)務(wù)必于passive referencequencher處均選擇“none”

體系配制

組分 體積(μL)
C buffer 20

5

L buffer
P-core 12
E-core 0.6
dNTPs(10 mM) 1.5
下游引物(10 μM) 2
下游引物(10 μM) 2
探針(10 μM) 0.6
DNA模板 3.8
B buffer 2.5
總體積 50

 

N:陰性對(duì)照; P:正對(duì)照

注意事項(xiàng):

  • 為保證液體試劑組分活性,請(qǐng)保證儲(chǔ)存溫度 ≤ -20 oC;試劑使用時(shí)請(qǐng)保持低溫,避免高溫放置過(guò)長(zhǎng)時(shí)間;
  • 在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請(qǐng)注意避免微量核酸染,并設(shè)置空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)組。
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