一、原理及適用范圍
蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)在自然界分布廣泛,在各種食品中的檢出率也較高,往往是食品在食用前保存溫度不當(dāng),放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),使污染在食品中的蠟樣芽孢桿菌或殘存的芽孢得以生長(zhǎng)繁殖,或是由于含有蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)生的熱穩(wěn)定毒素,而導(dǎo)致食物中毒的發(fā)生。中毒的發(fā)病率較高,一般為60%~。
蠟樣芽孢桿菌測(cè)試片(FilmplateTM Bacillus cereus BL210)是一種商品化的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品,由選擇性培養(yǎng)基、高分子吸水凝膠和專一性酶指示劑等構(gòu)成,一步培養(yǎng)顯色就可確認(rèn)是否原菌的存在,大大地簡(jiǎn)化了檢測(cè)程序,對(duì)于提高細(xì)菌性食物中毒突發(fā)事件的反應(yīng)能力具有重要的作用,同時(shí)也可在食品生產(chǎn)企業(yè)使用。本產(chǎn)品適用于乳制品、肉類、淀粉類食品、各種甜點(diǎn)等的快速檢測(cè)。 執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn):食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)蠟樣芽孢桿菌檢驗(yàn)(GB/T 4789.14)。
二、操作方法
1、樣品處理:取樣品25mL(g)放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液(或生理鹽水)的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi),制成1:10的樣品勻液。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL,注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi),振搖后成為1:100的樣品勻液。
2、接種:將蠟樣芽孢桿菌測(cè)試片(BL210)置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面,揭開(kāi)上層膜,用無(wú)菌吸管每個(gè)梯度各取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上,然后再將上層膜緩慢蓋下,靜置10s左右,使培養(yǎng)基凝固,每個(gè)稀釋度接種兩片,同時(shí)做一片空白對(duì)照。
3、培養(yǎng):將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中,并封口,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),堆疊片數(shù)不超過(guò)12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃,培養(yǎng)15~24h。
三、結(jié)果判讀
對(duì)測(cè)試片進(jìn)行觀察,呈藍(lán)綠色的菌落為蠟樣芽孢桿菌。對(duì)于出現(xiàn)陽(yáng)性菌落的樣品,用其他方法作進(jìn)一步的鑒定。
四、附加說(shuō)明
1、本產(chǎn)品具有很好的特異性,接種蠟樣芽孢桿菌純菌株產(chǎn)生典型的藍(lán)綠色點(diǎn),而大部分非目標(biāo)菌如大腸桿菌、大腸桿菌O157、沙門氏菌、*、副溶血弧菌和阪崎腸桿菌等均被抑制。
2、初步試驗(yàn)表明,蠟樣芽孢桿菌測(cè)試片對(duì)純菌的低檢測(cè)限為1cfu/mL。用蠟樣芽孢桿菌測(cè)試片檢測(cè)了23種食品樣品,同時(shí)接種平皿做對(duì)比試驗(yàn)。測(cè)試片檢出陽(yáng)性樣品7個(gè),檢出率為30.4%;用平皿法檢出陽(yáng)性樣品6個(gè),檢出率為26.1%,測(cè)試片法比平皿法高了4.3%。
3、注意使用過(guò)的測(cè)試片上帶有活菌,需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理 。
五、保存條件
本產(chǎn)品需存放在4℃~10℃冰箱中,保質(zhì)期為一年,鋁箔袋打開(kāi)后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好,放到冰箱中,一個(gè)月內(nèi)用完。在高濕度的環(huán)境中可能出現(xiàn)冷凝水,在拆封前將整包回溫至室溫。