糞鏈球菌的檢驗(yàn)技術(shù)與控制方法！
糞鏈球菌的檢驗(yàn)技術(shù)與控制方法！
一、生物學(xué)性狀
根據(jù)分類(lèi)原則，糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應(yīng)用C多糖抗原，根據(jù)蘭氏（Lancefield）血清學(xué)分類(lèi)，可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分腸球菌和非腸球菌兩類(lèi)。前者包括糞鏈球菌（S.faecalis）、屎鏈球菌（S.faecium）和堅(jiān)忍鏈球菌（S.durans）,后者有牛鏈球菌（S.bovis）和馬腸鏈球菌(S.equinus)。
糞鏈球菌菌形圓或橢圓，可順鏈的方向延長(zhǎng),直徑0.5-1.0微米,大多數(shù)成雙或短鏈狀排列,通常不運(yùn)動(dòng)。在豐富培養(yǎng)基上菌luo大而光滑，直徑1-2mm，全緣，罕見(jiàn)色素。其營(yíng)養(yǎng)要求低，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上也可生長(zhǎng)。能在10℃或45℃ pH 9.6或含6.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，并能耐65℃ 30分鐘。它可利用*為能源，發(fā)酵*，不發(fā)酵阿拉伯糖。在簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不需*。
近年來(lái)，DNA-DNA雜交結(jié)果顯示，腸球菌與鏈球菌屬同源程度低，故有學(xué)者建議另立腸球菌屬，與人類(lèi)有關(guān)者為糞腸球菌（E.faecalis）和屎腸球菌（E.faecium）。
二、致病性
糞鏈球菌引起的感染有尿路感染、化膿性腹部感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腹瀉發(fā)燒等。其中敗血癥繼發(fā)于泌尿性感染，皮膚、膽道、腸道等感染也可作為原發(fā)病灶。從天然乳清培養(yǎng)物中分離的菌株，能產(chǎn)生一種細(xì)菌素，叫腸球菌素（Enterocin），對(duì)單增李斯特氏菌有殺滅作用。
三、流行病學(xué)
糞鏈球菌為條件致病菌，它來(lái)源于人和溫血?jiǎng)游锏募S便，偶爾出現(xiàn)于感染的尿道及急性心內(nèi)膜炎。它能夠通過(guò)食品對(duì)人類(lèi)造成感染，因而常見(jiàn)于許多食品，如火腿腸、炸肉丸、布丁及經(jīng)過(guò)巴氏消毒的牛奶等，糞鏈球菌進(jìn)入食物鏈的主要原因是不衛(wèi)生的加工條件所致的，一般與直接的糞便感染無(wú)關(guān)。糞鏈球菌引起的感染大多是由于它的侵襲所造成，感染劑量較高，一般大于107個(gè)細(xì)菌。人、禽感染率，亦見(jiàn)于豬、牛、馬、山羊、綿羊及兔。
四、檢驗(yàn)與控制
1、檢驗(yàn)：
樣品制備 取25g或25mL樣品，放入225mL滅菌生理鹽水中，充分混勻，制成1：10樣品稀釋液。根據(jù)樣品的污染程度，制成適當(dāng)?shù)?0倍遞增稀釋液。
a.多管法：
用適當(dāng)?shù)南♂屢航臃N一套葡萄糖肉湯管。接種量為1mL或以下的，使用10mL單料管；接種量為10mL，使用10mL雙料管。35℃培養(yǎng)24-48h，并檢查記錄各管的混濁情況。用接種環(huán)將渾濁管中的培養(yǎng)物劃線(xiàn)于PSE平板上，倒置平板于36℃培養(yǎng)24h。平板上出現(xiàn)的帶棕色環(huán)的黑色菌落，確證為糞鏈球菌。根據(jù)接種的樣品量和確證為是糞鏈球菌的管數(shù)，查MPN表，報(bào)告每克樣品中的糞鏈球菌MPN值。
b.濾膜法：
傾注融化的4-5mL的KF瓊脂于平板上，若平板表面有氣泡，可用火焰灼除。根據(jù)樣品的污染程度，使用樣液的量為100，10，1.0，0.1或0.01mL。使用滅菌濾膜過(guò)濾樣液，以能在濾膜上生長(zhǎng)出20-100個(gè)菌落為宜。將濾過(guò)樣液的濾膜緊貼在KF瓊脂培養(yǎng)基表面上，避免出現(xiàn)氣泡。倒置平板于36℃培養(yǎng)48h。糞鏈球菌在KF平板濾膜上形成暗紅色至粉紅色菌落。將典型菌落接種于腦心浸液斜面上，36℃培養(yǎng)48h。用其培養(yǎng)物做過(guò)氧化氫試驗(yàn)，過(guò)氧化氫濃度為3%，陽(yáng)性反應(yīng)者為非糞鏈球菌群細(xì)菌。將陰性反應(yīng)者接種于腦心浸液肉湯，置45.5℃培養(yǎng)48h；同樣方式接種一管膽鹽肉湯，置36℃培養(yǎng)3天。在上述兩種情況下生長(zhǎng)者為糞鏈球菌。選擇生長(zhǎng)20-100個(gè)菌luo的濾膜，根據(jù)所使用的樣品量，計(jì)算出樣品每克（毫升）中的糞鏈球菌數(shù)。
c.平板計(jì)數(shù)法：
取1mL適當(dāng)稀釋液加入培養(yǎng)皿內(nèi)，傾入12-15mL的KF或PSE培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)動(dòng)平板充分混合。凝固后置36℃培養(yǎng)，KF平板培養(yǎng)48h，PSE平板培養(yǎng)24h。糞鏈球菌在KF平板上形成暗紅色至粉紅色菌luo，邊緣整齊，瓊脂表面下菌落呈橢圓或晶體狀；在PSE平板上形成帶棕色環(huán)的棕黑色菌luo。選擇有30-300個(gè)菌luo的平板進(jìn)行記數(shù)。按糞鏈球菌數(shù)/g(mL)報(bào)告結(jié)果。
2、控制
由于糞鏈球菌可通過(guò)食物對(duì)人類(lèi)造成感染，所以應(yīng)從以下幾個(gè)方面加以控制：
加強(qiáng)生產(chǎn)區(qū)域的衛(wèi)生管理，由于糞鏈球菌主要來(lái)源于人畜糞便，所以廁所要合理布局，避免糞便直接污染；生產(chǎn)人員要嚴(yán)格執(zhí)行個(gè)人衛(wèi)生制度。
在加工過(guò)程中，嚴(yán)格注意每個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)的控制，掌握好諸如溫度、水源衛(wèi)生等要素。
對(duì)擺放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的食物，如熟食制品、牛奶或奶制品等，要*加熱再食用，春夏季尤其要注意。
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