茄科羅爾斯通氏菌 百歐博偉生物 微生物菌種

茄科羅爾斯通氏菌 百歐博偉生物 微生物菌種

茄科羅爾斯通氏菌是Ralstonia屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。形狀不規(guī)則、稍凸起、白色、光滑、有光澤、不透明、革蘭氏陰性。主要用途為研究；教學(xué)。

一、菌種簡介

平臺編號：Bio-088892

提供形式：凍干物

拉丁屬名：Ralstonia Solanacearum

中文名稱：茄科羅爾斯通氏菌

拉丁名稱：Ralstonia solanacearum

來源歷史：←中國煙草總公司鄭州煙草研究院

收藏時間：2017-11-30

原始編號：TY2

原產(chǎn)國：中國

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究

特征特性：固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)時，菌落呈白色，流動性較強(qiáng)。菌體短桿狀，單個或成對排列，革蘭氏陰性?；趦?nèi)切葡聚糖酶基因(egl)序列，為演化型I，變種13。

具體用途：用于煙葉青枯病生防研究。

生物危害程度：四類

培養(yǎng)基編號：CM0002

培養(yǎng)基名稱：營養(yǎng)肉汁瓊脂

培養(yǎng)基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。推薦使用商品化成品培養(yǎng)基。

培養(yǎng)溫度：30℃

需氧類型：好氧

分離基物：煙草-煙桿

采集地：江西省撫州市南豐縣

保存方法：-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享

用途：用于煙葉青枯病生防研究。

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）

二、培養(yǎng)方法

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

三、使用范圍

（1）合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚，組成成分精確，重復(fù)性強(qiáng)，而且微生物在這類培養(yǎng)基中生長較慢。如高氏一號合成培養(yǎng)基、察氏（Czapek）培養(yǎng)基等。

（2）天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成，如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯，前者用于培養(yǎng)霉菌，后者用于培養(yǎng)細(xì)菌。這類培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定，也難以確定，但配制方便，營養(yǎng)豐富，培養(yǎng)效果好，所以常被采用。

（3）半合成培養(yǎng)基。在天然有機(jī)物的基礎(chǔ)上適當(dāng)加入已知成分的無機(jī)鹽類，或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分，如培養(yǎng)霉菌用的。這類培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要。

四、保存方法

1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。

2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

3、懸液保存法：

①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

②糖液保存法：適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

4、載體保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。

5、常用的冷凍保存法：

①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍的微生物保存法。

五、微生物菌種的培養(yǎng)

1、孢子制備

⑴ 放線菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

2、種子制備

⑴ 搖瓶種子制備

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級種子，把一級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級發(fā)酵。同樣道理，使用三級種子的發(fā)酵，稱為四級發(fā)酵。

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