使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱 | 天南星染料法PCR鑒定試劑盒說明書 |
英文名稱 | Rhizoma arisaematis |
貨號 | YSP8826 |
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PCR的反應(yīng)條件:
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。
(1S,2S)-2-(二苯基膦)環(huán)己胺 97%Geniposide;京尼平苷/梔子苷柴胡顆粒Rat N-MID-OT(N-MID Osteocalcin) ELISA Kit
Rat Hepc 25(Hepcidin 25) ELISA Kit
(1S,2S)-(-)-1, 2-二苯基-1, 2-二胺 98%Potassium sorbate;山梨酸鉀饅頭改良劑Rat Estrogen ELISA Kit
Rat Estrone(Estrone) ELISA Kit
(1S,2S)-N-(對苯磺酰)-1,2-二苯基二胺 98%Senegenin;遠志皂苷元五香粉Rat E2(Estradiol) ELISA Kit
Rat HCY(Homocysteine) ELISA Kit
(1S,2S)-(+)-N,N'-二基環(huán)己烷-1,2-二胺 98%Leonurine hydrochloride;鹽酸益母草堿咖喱粉Rat GAGs(Glycosaminoglycan) ELISA Kit
Rat TGFBR1(TGF-beta receptor type-1) ELISA Kit
(1S,2S)-(-)-1,2-環(huán)己二胺D-鹽 98%Econazole nitrate;硝酸益康唑白胡椒粉Rat TGFBR2(TGF-beta receptor type-2) ELISA Kit
Rat DCP(Des-gamma carboxyprothrombin) ELISA Kit
(S,S)-2,6-雙(4-異基-2-惡唑啉-2-基)吡啶 99%Bisdemethoxycurcumin;雙去氧基姜黃素復(fù)配肉制品水分保持劑Rat FBXO32(F-box only protein 32) ELISA Kit
Rat 3-MH(3-methylhistidine) ELISA Kit
(S,S)-N-(對苯磺酰)-1,2-二苯烷二胺(對異基苯)釕(II) Butylated Hydroxyanisole/BHA;基羥基茴香醚復(fù)配肉制品水分保持劑Rat MTOR(Serine/threonine-protein kinase Mtor) ELISA Kit
Rat MTL5(Tesmin) ELISA Kit
二酰基[(S)-(-)-2,2'-雙(二-P-苯基酰)-1,1'聯(lián)萘]釕 95%Neoagarohexaose;新瓊六糖三黃散Rat CK-18/KRT18(CytokeRatin 18) ELISA Kit
Rat ENK(enkephalin) ELISA Kit
2,2′:6′,2′′-三吡啶 98%Doxorubicin hydrochloride;鹽酸阿霉素情散Rat IL1RL1(IL-1 Receptor Like 1) ELISA Kit
Rat CTRP15(Complement C1q tumor necrosis factor-related protein 15) ELISA Kit
三基 97%Kanamycin mono sulfate;硫酸卡那霉素冰糖雪梨香精Rat Acan(Aggrecan core protein) ELISA Kit
Rat AP12(Apelin 12) ELISA Kit
天南星染料法PCR鑒定試劑盒說明書β-肌動蛋白抗體納米鐵粉 99.9%,50nm2-[(三(羥基)基)]-1-磺酸鈉pUNO1-hTRAILa
促腎上腺皮質(zhì)激素抗體納米鐵粉 99.9%,80nmTris磺酸pUNO1-hTRAM
肌動蛋白α抗體苯酮 GCS,≥99.5% (GC)地霉素pUNO1-hTRANCEa
神經(jīng)絲蛋白抗體銨 AR,99.0%松油醇pUNO1-hTRANCEb
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型1--2-萘酚-4-磺酸 ACS reagent, ≥98%三基酸鹽pUNO1-hTREM1
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7茜素絡(luò)合指示劑 高純級,98%四甘醇pUNO1-hTREM2
內(nèi)收蛋白抗體茜素絡(luò)合指示劑 Indicator三撐二胺pUNO1-hTREML2
脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體烯腈 Standard for GC(劇)硬脂酸酯pUNO1-hTREML4
脂聯(lián)素受體-1抗體鄰苯酸 Standard for GC, ≥99.5% (GC)基三銨pUNO1-hTREX1a
脂聯(lián)素受體-2抗體1,4-炔二醇 Standard for GC, ≥99.5% (GC)四銨pUNO1-hTRIAD3a
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR