小鼠氣道平滑肌細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 英文名稱：HBMEC 規(guī)格:5 x 10^5 cells/vial
腦血管平滑肌細(xì)胞 英文名稱：HBVSMC 規(guī)格:5 x 10^5 cells/vial
腦血管外膜成纖維細(xì)胞 英文名稱：HBVSMC 規(guī)格:5 x 10^5 cells/vial
腦血管周細(xì)胞 英文名稱：HBVP 規(guī)格:5 x 10^5 cells/vial
產(chǎn)品屬于：
產(chǎn)品名稱：小鼠氣道平滑肌細(xì)胞
產(chǎn)品英文：ASMC
貨號：FS-01X9634
細(xì)胞培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%P/S
生長狀態(tài)：貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格：1×106
單位：T25/瓶
是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度（℃）37
運輸溫度（℃）：常溫
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞 在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。 3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性 通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。 4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。 2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。 3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。 4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。 6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。 7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 |
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒 Human Interleukin-2 receptor，IL-2R ELISA Kit
人β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒Human Interferon β，IFN-β/IFNB ELISA Kit
人轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒 Human transforming growth factors β2，TGFβ2 ELISA Kit
人白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒Human leukotriene D4，LT-D4 ELISA Kit
人生長激素釋放因子(GH-RF)ELISA試劑盒 Human growth hormone relasing factor，GH-RF ELISA Kit
人巨噬細(xì)胞趨化因子(MCF)ELISA試劑盒 Human macrophage chemotatic factor，MCF ELISA Kit
人α/β干擾素受體(IFN-α/βR)ELISA試劑盒 Human Interferon α/βReceptor，IFN-α/βR ELISA Kit
人B細(xì)胞生長因子(BCGF)ELISA試劑盒 Human B cell growth protein，BCGF ELISA Kit
人B細(xì)胞分化因子(BCDF)ELISA試劑盒 Human B cell differetiation factor，BCDF ELISA Kit
人可溶性粘附分子(Sam)ELISA試劑盒 Human soluble adhesion molecules，Sam ELISA Kit
人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA試劑盒Human Perforin/Pore-forming protein，PF/PFP ELISA Kit
人多效生長因子(PTN)ELISA試劑盒Human pleiotrophin，PTN ELISA Kit
人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒Human lymphocyte factor ELISA Kit
人神經(jīng)保護(hù)因子(CVNPF)ELISA試劑盒 Human Cobra venom neuronal protective factor，CVNPF ELISA Kit
人可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)ELISA試劑盒Human soluble Tumor Necrosis Factorαreceptor，sTNFαR ELISA Kit
人可溶性細(xì)胞因子受體(sCKR)ELISA試劑盒Human soluble cytokine receptor，sCKR ELISA Kit
人集落刺激因子(CSF)ELISA試劑盒Human colony-stimulating factor，CSF ELISA Kit
人凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA試劑盒Human apoptosis inducing factor，AIF ELISA Kit
人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)ELISA試劑盒Human Placenta Cadherin，P-cad ELISA Kit
小鼠氣道平滑肌細(xì)胞beta-Amyloid(35-42) β淀粉樣肽/Aβ42抗體 0.1ml
ER α 雌激素受體α抗體 0.1ml
CKLFSF2/CMTM2 趨化素樣因子超家族成員2抗體 0.2ml
COX7A2 c氧化酶VIIA亞型2抗體 0.1ml
CKLFSF2 isoform 1 趨化素樣因子超家族成員2亞型1抗體 0.2ml
MAP65/ASE 1 擬南芥MAP65蛋白抗體 0.2ml
Streptavidin/SA protein 鏈酶親和素抗體 0.1ml
human Serum IgA 人血清型免疫球蛋白A抗體 0.2ml
