備試劑與收集血樣:
1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè), 2-8 ℃ 保存48 小時(shí);更長時(shí)間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管,管加標(biāo)本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。
3. 10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產(chǎn)品名稱 | 人抗角蛋白抗體(AKA)elisa進(jìn)口試劑盒 |
英文名稱 | Human anti keratin antibody (AKA) ELISA Kit |
貨號(hào) | BJ-G10513 |
規(guī)格:96T/48T
特點(diǎn):靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好
用途:科研實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷
運(yùn)輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運(yùn)輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標(biāo)本等等
檢測(cè)程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA進(jìn)口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
實(shí)驗(yàn)步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達(dá)到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),直接進(jìn)入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
MelanoFectagen? 色素細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒普盧利沙星;普利沙星質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRPrulifloxacin
牛腎細(xì)胞;MDBK(NBL-1) 人胃癌細(xì)胞,NCI-N87細(xì)胞 NS-1細(xì)胞,小鼠骨髓瘤細(xì)胞普盧利沙星;普利沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Prulifloxacin
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞(彝族);KM9345-HIAA;5-羥基吲哚-3-乙酸(血清素代謝物)質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,進(jìn)分5-HIAA
SLAMF7 Others Human 人 SLAMF7 / CRACC / CD319 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 頭孢地嗪酸;頭孢地嗪酸質(zhì)量規(guī)格:>90%,BRCefodizime acid
CL-0080WB-F344(大鼠肝上皮樣干細(xì)胞)5×106cells/瓶×2右美沙芬-d3質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Dextromethorphan-d3
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);F9-CAG-tTA-3E5 中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL沙門氏志賀氏屬瓊脂培養(yǎng)基5克RT
THP-1人單核白血病細(xì)胞 Human側(cè)金盞花醇;啊東糖醇;務(wù)五醇;福壽草醇;側(cè)金盞(務(wù))糖醇;核糖醇 cdonitol;Ribitol 488-81-3
CNAP2 Others Mouse 小鼠 CNAP2 / PR2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 4--1-酚 4-Chloro-1-naphthol (≥98%, 4CN) 604-44-4 5G 核酸衍生物
人前列腺成纖維細(xì)胞RNAHPrF miRNA5 μgformide,DEIONIZED去離子甲先胺超級(jí)無色微粘稠液體COLDsigma
BLNK Others Human 人 BLNK 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) Fluorescein2Na 25g/100g/500g 原裝 Amresco 0577
COLGALT2 Others Human 人 GLT25D2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) VANTAGEREVIEWSTRIPPINGBUFFER優(yōu)勢(shì)型剝離試劑500 mlCOLD
CM-H062人腎管狀上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL2-基-2-丁基-1,3-炳二醇 2-BUTYL-2-qTHYL-1,3-PROPcNqDIOL 112-84-4
Hep-2, 人喉癌細(xì)胞系 骨髓瘤,45.6.TG1.7細(xì)胞 Hs888Lu(人肺成纖維細(xì)胞)D-賴酸鹽酸鹽25克
小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤;M5076葡聚糖T750毫克
CD74 Others Human 人 CD74 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) ,3-兒價(jià)分2,3-DImetxYLpxenOL PESTANAL
人抗角蛋白抗體(AKA)elisa進(jìn)口試劑盒VEGFA Protein Human 重組人 VEGF121 / VEGF-A 蛋白普魯卡因青霉素GPenicillin G procaine質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
狗間葉干細(xì)胞(脂肪)(5×105) GBC-SD, 人膽囊癌細(xì)胞 Human芐星青霉素GPenicillin G benzathine salt質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
腮腺細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)尼泊金異丁酯-d9Isobutyl-d9 Paraben質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
TEK Others Mouse 小鼠 Tie2 / TEK 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 尼泊金異丁酯Isobutyl Paraben質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
大鼠腎小管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL尼泊金異丙酯Isopropyl Paraben質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
我司供應(yīng)的elisa進(jìn)口試劑盒免費(fèi)代測(cè),全程ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo),免費(fèi)代做實(shí)驗(yàn),索取產(chǎn)品說明書。