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產(chǎn)品名稱 | COLO 205 (結(jié)腸癌細(xì)胞) |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96386 |
商品屬性：
名稱 COLO 205 (結(jié)腸癌細(xì)胞) 別稱Colo 205; CoLo 205; COLO-205; Colo-205; COLO.205; Colo205; COLO205; Co 205 種屬人類 年齡（性別）男性，70歲 組織來源結(jié)直腸腺癌，腹水轉(zhuǎn)移 生長特性半貼半懸 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述COLO 205細(xì)胞是由T·U·Sample等人于1957年從患有結(jié)腸癌的70歲男性白人的腹水分離而建系的，該病人在取腹水樣品前已用5-氟治療4-6周；COLO 205細(xì)胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例5×10^5-1×10^6cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~25-30小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells). 基因表達(dá)情況carcinoembryonic antigen (CEA) 1.5 to 4.1 ng/10^6 cells cells/10 days; keratin; interleukin 10 (IL-10, interleukin-10), The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠 APOC2 基因全長ORF克隆
大鼠 CRYAB 基因全長ORF克隆
大鼠 SPC25 基因全長ORF克隆
大鼠 NDUFA3 基因全長ORF克隆
大鼠 UBB 基因全長ORF克隆
大鼠 ALDOA 基因全長ORF克隆
大鼠 RAMP3 基因全長ORF克隆
大鼠 ENO3 基因全長ORF克隆
大鼠 RPL36A 基因全長ORF克隆
大鼠 SERPINF2 基因全長ORF克隆
COLO 205 (結(jié)腸癌細(xì)胞) 泛酸測定培養(yǎng)基 Pantothenic Acid Assay Medium 250g 0.312-20 ng/mL 病毒H9亞型(AIV-H9)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)
5g 1- 萘胺 1-Naphthylamine -20℃保存
2 ug pMSCV pMSCV 低溫運輸，-20℃保存氰化高鐵血紅蛋白參比液(4種×2套)進口、國產(chǎn)Cyanomethemoglobin reference solution10毫升×8支
4次 大提柱式酵母DNAout 0.625-40 ng/mL 人上皮粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA試劑盒
96支 10 μL RNase-free白吸頭（盒裝已滅菌長尖） 常溫 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Transcription factor 7-like 2
酸化K氏培養(yǎng)基 K's medium acidification 250g
1000U SP6 RNA聚合 SP6 RNA Polymerase -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人突觸極蛋白(Synaptopodin)ELISA試劑盒
20次 Southern Marker DL2000（DIG） 0.156-10 ng/mL 人G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)激活因子1 ELISA試劑盒
50T 流行性乙型腦炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存細(xì)菌L型增菌液進口、國產(chǎn)用于L型細(xì)菌增菌培養(yǎng)65
卻普曼瓊脂 Chapman Agar 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human T-cell surface antigen CD2
B5培養(yǎng)基 B5 Medium 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Oncoprotein-induced transcript 3 protein
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
