參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：單核細胞增生李斯特氏菌核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-P10766
產(chǎn)品分類：熒光探針法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
GIM4.3=CGMCC4.252產(chǎn)慶大霉素模式菌株: no種屬: Streptomyces│albidoflavus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃

 -1588℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

金黃色葡萄球菌研究模式菌株: no豬膿包灶提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37

運動發(fā)酵單孢菌培養(yǎng)基: 33模式菌株: no污泥提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

可可鏈霉菌培養(yǎng)基: 0027代謝產(chǎn)物具有殺蟲活性。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法；礦物油法；定期移植法

假交替單胞菌生長條件: 28℃培養(yǎng)基: 524海水提供形式: 凍干物模式菌株: no 真空冷凍干燥法

金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基: 14作為CH型溶菌酶的作用底物，遺傳工程提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 37℃ 定期移植法

正青霉屬活性物質，組織蛋白酶B抑制活性模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0038生長條件: 28C

 -1589℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

 CMCC2401培養(yǎng)基: 64模式菌株: no種屬: Escherichia│coli提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法

古老短桿菌潛在的有機污染物降解菌/分離自原油富集菌群模式菌株: no水樣/深海底層水樣提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 1001生長條件: 28℃

龐孢馬杜拉放線菌培養(yǎng)基: 39模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法

藤黃紫假交替單胞菌有機污染物降解菌/石油烴類降解菌模式菌株: no水樣/表層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃

釀酒酵母用于制面包模式菌株: no英國干酵母提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃

反卷毛殼生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

 -1590℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

5-氮胞苷/阿扎胞苷(標準品)proCNP/NPPC (pro-natriuretic peptide)  促尿鈉排泄肽前體C抗原TIRAP  白介素1受體銜接蛋白抗體

鹽氮卓斯汀NPY2R(Neuropeptide Y Receptor Type 2)  神經(jīng)肽Y受體2（多肽）TIP47/M6PRBP1  脂滴相關蛋白TIP47抗體

鹽氮卓斯?。藴势罚?/font>NPY1R (neuropeptide Y1 receptor)  神經(jīng)肽Y1受體抗原TIP30  TIP30蛋白抗體

阿奇霉素NQO1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase l)  醌氧化還原酶抗原TIMP-4  金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體

阿奇霉素（標準品）NR1/NMDAR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1)  谷氨受體1（多肽）TIMP-3  金屬蛋白酶組織抑制因子-3抗體

氨曲南NR1/NMDAR1/GLUR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1)  谷氨受體1抗原TIMP-2  金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體

氨曲南（標準品）NR1/NMDAR1  谷氨受體1TIMP-1(NT)  金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（N端）

巴卡丁 IIINR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprtate receptor 2C)  谷氨受體2C（多肽）TIMP-1(CT)  金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（C端）

巴卡丁 III（標準品）N-ras  原癌基因抗原TIMM17A  線粒體內膜轉位酶抗體

巴芬Nrf2 peptide  核因子2相關因子2抗原TIM4  T淋巴膜蛋白4抗體
單核細胞增生李斯特氏菌核酸檢測試劑盒Tazobactamsodium　他唑巴坦鈉　質量規(guī)格：>98%,BR

Tazobactamsodium　他唑巴坦鈉(標準品)　質量規(guī)格：>98%,BR

D-Cycloserine　D-環(huán)絲氨　質量規(guī)格：>98%,BR

D-Cycloserine　D-環(huán)絲氨(標準品)　質量規(guī)格：>98%,BR

Tetracyclinehydrochloride　鹽四環(huán)素　質量規(guī)格：>98%,BR

Tetracyclinehydrochloride　鹽四環(huán)素(標準品)　質量規(guī)格：>98%,BR

Carbenicillindisodium　/羧芐西林鈉　質量規(guī)格：>98%,BR

Carbenicillindisodium　羧芐西林鈉(標準品)　質量規(guī)格：>98%,BR

Fenbendazole　芬達唑；硫咪唑　質量規(guī)格：>98%,BR

Fenbendazole　芬達唑；硫咪唑(標準品)　質量規(guī)格：>98%,BR

D-Cloprostenolsodium　前列醇鈉(D型）　質量規(guī)格：>98%,BR

DL-Cloprostenolsodium　前列醇鈉(DL型）　質量規(guī)格：>98%,BR

LigustrazineHCl　鹽川芎嗪(標準品)　質量規(guī)格：>98%,BR

LigustrazineHCl　鹽川芎嗪　質量規(guī)格：>98%,BR

Cephalexin　頭孢氨芐　質量規(guī)格：>98%,BR
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。