參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：甲型流感病毒核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P9630
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。

人Ⅸ型膠原蛋白ELISA檢測試劑盒 Ⅸ-C Collagen Type Ⅸ 3ng/mL~96ng/mL 0.1
人adropinELISA檢測試劑盒 AD adropin 12.5pg/mL~400pg/mL 1
人AKT蛋白ELISA檢測試劑盒 AKT AKT 1μmol/L~32μmol/L 0.1
人AP2A2ELISA檢測試劑盒 AP2A2 Adaptor-Related Protein Complex 2, alpha 2 Subunit 1.5ng/mL~48ng/mL 0.1
人脂肪炎癥因子ELISA檢測試劑盒 Apelin Apelin 2.5ng/mL~80ng/mL 0.1
人apelin 12ELISA檢測試劑盒 AP12 apelin 12 0.25ng/mL~8ng/mL 0.1
人apelin 13ELISA檢測試劑盒 AP13 apelin 13 0.25ng/mL~8ng/mL 0.1
人apelin 36ELISA檢測試劑盒 AP36 apelin 36 0.25ng/mL~8ng/mL 0.1
人Argonaut-2蛋白ELISA檢測試劑盒 Ago-2 Argonaut2 6.25ng/mL~200ng/mL 1
人ATP酶ELISA檢測試劑盒 ATPase ATPase 0.5U/mL~16U/mL 0.1
人ATP依賴的RNA解旋酶AELISA檢測試劑盒 DHX9 DHX9 0.5ng/mL~16ng/mL 0.1
人B7-1ELISA檢測試劑盒 CD80 B7-1 50pg/mL~1600pg/mL 10
人B7同系物6ELISA檢測試劑盒 B7-H6 B7-H6 1ng/mL~32ng/mL 0.1
人B7同源體1ELISA檢測試劑盒 B7-H1 B7-H1 31.25pg/mL~1000pg/mL 1
人B7同源體2ELISA檢測試劑盒 B7-H2 B7-H2 0.25ng/mL~8ng/mL 0.1
人B7同源體3ELISA檢測試劑盒 B7-H3 B7-H3 1ng/mL~32ng/mL 0.1
人Bcl-2相關(guān)X蛋白ELISA檢測試劑盒 BAX Bcl-2 associated X protein 0.25ng/mL~8ng/mL 0.1
人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白ELISA檢測試劑盒 Bid BH3 interacting domain death agonist 1.5pg/mL~48pg/mL 0.1
人Bmi-1基因ELISA檢測試劑盒 BMI-1 B cell-specific MLV inte-gration site-1 0.25ng/mL~8ng/mL 0.1

Alpha-Synuclein 核突觸蛋白抗體
beta-Actin (Loading Control) β-肌動(dòng)蛋白/β-Actin 抗體（內(nèi)參抗體）
beta-Amyloid 1-42 (CT) β淀粉樣肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗體
beta Amyloid 1-16 β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16抗體
beta Amyloid 1-28 β淀粉樣肽1-28/β-Amyloid 1-28抗體
ARIP2a 激活素受體2A抗體
Aquaporin 5 水通道蛋白5抗體
beta Amyloid 1-40 β淀粉樣肽（1-40）抗體
beta Amyloid 1-42 β淀粉樣肽（1-42）抗體
APOA1 載脂蛋白A1抗體
Beta-arrestin 1 β-抑制蛋白1抗體
Ankyrin B 錨定蛋白B抗體
ATP7A 銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)α鏈抗體
Amphetamine(2A3F) 單克隆/抗體
ASMTL ASMTL蛋白抗體
TRA16 激素受體相關(guān)蛋白16抗體
甲型流感病毒核酸檢測試劑盒beta-Amyloid 1-40 (CT) β淀粉樣肽1-40 C端/Aβ1-40 C端抗體
ASB13 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族13抗體
beta Amyloid 31-35 β淀粉樣肽（31-35)/Aβ 31-35 抗體
beta-Amyloid 1-40(CT) β淀粉樣肽 1-40（C端）抗體
Beta arrestin 2 β-抑制蛋白2抗體/β休止蛋白2/β-arrestin抗體
Anthrax 炭疽桿菌抗體
ACD 腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白抗體
Angiotensin II type 1A receptor 血管緊張素Ⅱ1A型受體抗體
ABI1 ABI1/SSH3BP1蛋白抗體
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。