參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱(chēng)：魚(yú)類(lèi)神經(jīng)壞死病毒（VNN）核酸檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P10406
產(chǎn)品分類(lèi)：熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線(xiàn)性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴(lài)的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法：
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi)，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái)，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以?xún)?nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
AS3.284培養(yǎng)基: 15檸檬菌種屬: Aspergilluscarbonarius(Bainier)Thom安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25-28℃
鏈霉菌屬菌抗白色念珠菌模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0039生長(zhǎng)條件: 28C
-507℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥
栓菌屬培養(yǎng)基: CM0014抗流感病提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28C 真空冷凍干燥
芽孢桿菌培養(yǎng)基: 0223模式菌株: no水體提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 30℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
爪哇擬青霉培養(yǎng)基: 14模式菌株: no空氣提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28 定期移植法
ATCC15442研究；分析檢測(cè)。研究、質(zhì)量控制。模式菌株: no種屬: Pseudomonas aeruginosa提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。生長(zhǎng)條件: 37℃，嚴(yán)格好氧。
豬腦心肌炎病研究模式菌株: no病死豬脾臟提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 0生長(zhǎng)條件: 37
粉狀畢赤酵母用于醬油釀造模式菌株: no醬油提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 13生長(zhǎng)條件: 28℃
-508℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥
短芽孢桿菌生長(zhǎng)條件: 35-37℃培養(yǎng)基: CM0003提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法
炭疽芽孢桿菌生長(zhǎng)條件: 37℃培養(yǎng)基: CM0116提供形式: 凍干物安全等級(jí): 3模式菌株: no 真空冷凍干燥法
矩圓黑盤(pán)孢培養(yǎng)基: 14模式菌株: no枝干病斑提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25-27 定期移植法
淡紫擬青霉培養(yǎng)基: 14模式菌株: no植物根面提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28-30 定期移植法
LMG24629T=CCTCCAB208229T=H32模式菌株；潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油富集菌群模式菌株: yes種屬: Altererythrobacter│marinus水樣/深海底層水樣提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 471生長(zhǎng)條件: 25℃
球孢白僵菌生長(zhǎng)條件: 28℃培養(yǎng)基: 0436提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no
鄰本二價(jià)酐Phthalic anhydrideAR500g
N554-25GL-Cysteine，xy7nochloride L-半胱安鹽鹽10318-18-025g36
S0639-500Gwo7ium Azide 疊淡鈉44448-44-8500g
Red Blood Cell Lysis Buffer500ml
N-乙酰神經(jīng)安(唾液)25mg
1,2-二錄乙烷¤1,2-Dichloroethane色標(biāo)2ml
LBF06Anti-TRAIL Mab245
CB47589-2MG 每速C1950-7-72mg
DEAE葡聚糖50g
質(zhì)粒大量提取試劑盒(非柱式法)5T
大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒 ，英文名： IGFBP-1 ELISA Kit
人抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanai-Thyroid-Peroxidaseaibody,TPO-AbELISAKit 96T/48T
大鼠β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)免疫試劑盒 Rat iegrin β2,ITG β2/CD11+CD18 Elisa Kit
CLIAKitforsEM-1(HumansolubleiggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1)ELISAKit人可溶性髓系觸發(fā)受體-1規(guī)格：48T/96T
人體血小板高純分離試劑盒10次(5毫升/次)
ELISAKitai-typhus-Ab人抗斑疹傷寒抗體規(guī)格：48T/96T
魚(yú)類(lèi)神經(jīng)壞死病毒（VNN）核酸檢測(cè)試劑盒棕矢車(chē)菊素18085-97-7英文名：Jaceosidin
英文別名：5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-6-methoxy-chromen-4-one
登錄號(hào)：18085-97-7
分子式：C17H14O7
分子量：330.29
分子結(jié)構(gòu)：
外觀(guān)：黃色針晶
規(guī)格：20 mg/支
純度：≥ 98%
用途：用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來(lái)源：茜草科巴戟天屬植物巴戟天Morinda officinalis How.
溶解性：溶于DMSO、乙醇、
熔點(diǎn)：227～230℃
藥理藥效：抗腫瘤，抗氧化、清除氧自由基。
貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長(zhǎng)一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長(zhǎng)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。
