實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 貨號 |
黑龍江立克次體核酸檢測試劑盒 | 熒光PCR法 | FS-P9995 |
PCR技術(shù)的定量原理：
?
擴增曲線
在Real-time qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
Epichloe brachyelytri Schardl et Leuchtmann名稱: 小鼠雜交瘤；IL-8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 鼠B淋巴瘤；6A8/6F10/1A6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
dried名稱: 小鼠雜交瘤；INHA(Inhibinalpha) RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠雜交瘤；InfluenzaBvirusNucleoprotein RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Neisseria meningitidis (Albrecht and Ghon) ..名稱: 小鼠雜交瘤；UC10-4F10-11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 鼠B淋巴瘤；MR1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Moraxella catarrhalis (Frosch and Kolle) Bo ..名稱: 人前列腺癌；LNCaP1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula名稱: 人前列腺癌；LNCaP2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Verticillium lecanii (Zimmermann) Viegas, a ..名稱: 人癌；SK-BR-3[SKBR-3；SKBR3] McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
Cochliobolus heterostrophus Drechsler, tele ..名稱: 人黑色瘤系；A375[A-375] DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Rattus norvegicus, rat名稱: 人癌系；CWR22-RV1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Mus musculus breast; derived from metastati ..名稱: 艾氏腹水癌；EAC RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Homo sapiens, human名稱: 人肝癌；HCCLM3 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 小鼠癌；4T1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 昆蟲；Hi-five(BTI-TN-5B1-4) Grace'sInsectMedium(GIMw/oBSA,FCS,WholeEggUltrafiltrate)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱: 人癌；BT474 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
黑龍江立克次體核酸檢測試劑盒人免疫球蛋白j鏈(Ig-j)ELISA試劑盒RBP-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人果糖1,6二磷醛縮酶(FDA)ELISA試劑盒RBP-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA試劑盒RBPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人免疫球蛋白輕鏈kappa抗體(κ-IgLC)ELISA試劑盒RBPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人多免疫球蛋白受體(poly-IgR)ELISA試劑盒RCAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(IgHV)ELISA試劑盒ReninELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人免疫球蛋白重鏈(IgH)ELISA試劑盒ResistinELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA試劑盒RFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
