實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 貨號(hào) |
鮑曼不動(dòng)桿菌(AB)核酸檢測(cè)試劑盒 | 熒光-PCR法 | FS-P10467 |
PCR技術(shù)的定量原理:?
擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
-669℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
根瘤菌培養(yǎng)基: 63模式菌株: no珍珠葉相思提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28 定期移植法
小單孢菌屬抗細(xì)菌;抗金黃色葡萄球菌;抗枯草芽孢桿菌模式菌株: no樹根土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0012生長(zhǎng)條件: 35-37C
DSM40194=ATCC23954=CBS937.68=IFO12906=ISPType strain. Produces racemomycine complex, strept模式菌株: yes種屬: Streptomyces│racemochromogenes提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 0038生長(zhǎng)條件: 28℃
禽呼腸孤病研究模式菌株: no鵝提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 0生長(zhǎng)條件: 37
漢遜德巴利酵母近海酵母模式菌株: no生物樣/海藻提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 513生長(zhǎng)條件: 28℃
貝倫格葡萄座腔菌梨生?;团囵B(yǎng)基: 14模式菌株: no樹皮上小瘤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28 定期移植法
-670℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
鏈霉菌屬產(chǎn)生抗腫瘤活性物質(zhì)模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0012生長(zhǎng)條件: 28C
海假交替單胞菌培養(yǎng)基: 471微生物/耐冷菌;產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)bate-半乳糖苷酶水樣/海冰鹵液提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
伊氏利斯特氏菌培養(yǎng)基: 538食品檢驗(yàn)提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 37℃ 真空冷凍干燥法
產(chǎn)黃青霉培養(yǎng)基: 0013模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
斯氏假單胞菌在M9培養(yǎng)基中抗普斯特的濃度達(dá)500mg/L。模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃
星形斯塔普氏菌潛在石油烴類降解菌/生物活性物質(zhì)篩選模式菌株: no水樣/上層海水提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 472生長(zhǎng)條件: 25℃
-671℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
鏈格孢屬培養(yǎng)基: 14模式菌株: no病葉病斑提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25-28 定期移植法
3-基噠嗪鹽鹽 4-硝基乙胺鹽鹽 異丙基溴化
Fmoc-L-4-丙 3-基環(huán)己烷 環(huán)戊基溴化
3,5-二磺酰 二(2-噻吩基)乙醇東莨菪酯 3-甲基-5-(2-羥基乙基)-4-甲基噻唑啉
2--4-磺酰 N-羥甲基鄰 4-羥基-3-己
Pendimethalin 二甲戊靈 40487-42-1
芐基化 6921-34-2
Chlorotributyltin 三丁基化錫 1461-22-9
Dibutyltin 二丁基馬來錫 28586
大鼠吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)ELISA試劑盒 ,英文名: IDO ELISA Kit
人多免疫球蛋白受體(poly-IgR)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanpolyimmunoglobulieceptor,poly-IgRELISAKit 96T/48T
大鼠白介素11(IL-11)免疫試劑盒 Rat Ierleukin 11,IL-11 ELISA KIT
CLIAKitfoARC/CCL17ELISAKit大鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子規(guī)格:48T/96T
人體MMP3RFLP基因分析試劑盒20次
ELISAKiNP-Ab人抗核糖核蛋白抗體規(guī)格:48T/96T
鮑曼不動(dòng)桿菌(AB)核酸檢測(cè)試劑盒長(zhǎng)春質(zhì)2468-21-5英文名:Catharanthine
英文別名:(+)-3,4-Didehydrocoronaridine
登錄號(hào):2468-21-5
分子式:C21H24N2O2
分子量:336.42
分子結(jié)構(gòu):
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來源:夾竹桃科植物長(zhǎng)春花Catharanthus roseus (L.)G.Don的全草
藥理藥效:止痛、消炎、安眠、通便及利尿等。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年