產(chǎn)品介紹:
XTT(二甲氧唑黃)是一種類似于MTT 的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,活細胞線粒體中存在與輔酶Ⅱ相關(guān)的脫氫酶,可將黃色的XTT 還原成水溶性的橘黃色的甲臜。生成的甲月贊能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,不形成顆粒,可直接用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測定吸光值。 操作方法 1. 96 孔板加入細胞100μL/孔(約1×104),置37℃ 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 小時。2.加入適當濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃,含5% CO2 空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4. 向各孔中加入50 μl 的XTT 檢測工作液。 5. 37℃下孵育1~4 小時。 6. 酶標儀在450nm 波長處檢測每孔的光密度。 結(jié)果分析 1. 細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加XTT 工作液,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加XTT 工作液,無細胞),各重復孔的OD 值取均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 2. 求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。 |
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 |
XTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Kit | 500T|1000T | FS-X9588 |
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)elisa檢測試劑盒 英文名稱:β-EPR ELISA Kit,β-EPR,
白蛋白(ALB)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ALB ELISA Kit,ALB,
α乳清蛋白(α-La)elisa檢測試劑盒 英文名稱:α-La ELISA Kit,α-La,
T細胞活化連接蛋白(LAT)elisa檢測試劑盒 英文名稱:LAT ELISA Kit,LAT,
RNA結(jié)合蛋白FUS(FUS/TLS)elisa檢測試劑盒 英文名稱:FUS/TLS ELISA Kit,F(xiàn)US/TLS,
Lben丙氨suan解氨mei(PAL)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PAL ELISA Kit,PAL,
C型凝集su結(jié)構(gòu)域家族4成員E(CLEC4E)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CLEC4E ELISA Kit,CLEC4E,
CC趨化因子7(CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7 ELISA Kit,CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7,
Ⅳ型前膠原氨基末端肽(PⅣNP)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PⅣNP ELISA Kit,PⅣNP,
5羥乙suan(5-HIAA)elisa檢測試劑盒 英文名稱:5-HIAA ELISA Kit,5-HIAA,
基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白(LUM)elisa檢測試劑盒 英文名稱:LUM ELISA Kit,LUM,
過氧化氫mei(CAT)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CAT ELISA Kit,CAT,
花生四烯suan15脂加氧mei(ALOX15/LOG15)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ALOX15/LOG15 ELISA Kit,ALOX15/LOG15,
骨成型蛋白2(BMP-2)elisa檢測試劑盒 英文名稱:BMP-2 ELISA Kit,BMP-2,
高半胱氨suan(Hcy)elisa檢測試劑盒 英文名稱:Hcy ELISA Kit,Hcy,
鈣調(diào)磷suanmei(CaN)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CaN ELISA Kit,CaN,
肺表面活性蛋白D(SP-D)elisa檢測試劑盒 英文名稱:SP-D ELISA Kit,SP-D,
XTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑葡jiaan標準品 規(guī)格:500mg 英文名稱:Meglumine (AS)
力農(nóng)相關(guān)物質(zhì)A標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Amrinone Related Compound A
敵畏標準品 規(guī)格:150mg 英文名稱:Dichlorvos (AS)
托普利標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Captopril
醋suan鈣標準品 規(guī)格:1g 英文名稱:Calcium Acetate (AS)
伊班膦suan相關(guān)物質(zhì)A標準品 規(guī)格:25mg 英文名稱:
lv化乙酰jia標準品 規(guī)格:500mg 英文名稱:Methacholine Chloride (AS)
西酞普蘭相關(guān)物質(zhì)D標準品 規(guī)格:15mg 英文名稱:
泮托拉zuo相關(guān)物質(zhì)D和F混合物標準品 規(guī)格:20mg 英文名稱:
那西丁標準品 規(guī)格:500mg 英文名稱:Phenacetin