Virus DNA/RNA cDNA Synthesis Kit
商品屬性：
產(chǎn)品分類 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
RNA相關(guān)產(chǎn)品 | 100T | BJ-PJ6632 |
商品介紹：
描述：本試劑盒采用穩(wěn)定高效的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系 5×Golden RT MasterMix 進(jìn)行 RNA 的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，使用時(shí)只需加入模 板、引物和 RNase Free H2O 即可，大大簡化了操作過程、 提高了效率、減少了操作過程中的人為誤差。具有快速簡便、 重復(fù)性高、特異性好、靈敏度高和穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。專用于 病毒 DNA/RNA 樣品的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。 該預(yù)混體系包含點(diǎn)突變致 RNase H 活性缺失的 Golden MLV Reverse Transcriptase 反轉(zhuǎn)錄酶、dNTP、反應(yīng) Buffer 和 RNase Inhibitor。該試劑盒采用的反轉(zhuǎn)錄酶去除了 RNase H 活性，從而避免反轉(zhuǎn)錄過程中降解 RNA。同時(shí)經(jīng)過突變文 庫篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，可耐受 55℃高溫反應(yīng)。相比 于低溫條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開 RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而提高復(fù)雜 RNA 模板的擴(kuò)增性能、提高反轉(zhuǎn) 錄 cDNA 的長度和產(chǎn)量，從而提高后續(xù)檢測的靈敏度。合成 的第一鏈 cDNA 可廣泛用于 2nd Strand 的合成、雜交、PCR 擴(kuò)增、Real-Time PCR 反應(yīng)等。
組分
儲(chǔ)存：請置于-20°C，可保存 3 年；避免反復(fù)凍融。
注：如 5×Golden RT MasterMix 出現(xiàn)沉淀屬正常現(xiàn)象，可用手捂化，混合均勻后使用不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一步法 cDOn
1. 按以下組分配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液
病毒 DNA/RNA 樣品 2~10μl
5×Golden RT MasterMix 4μl
*20×Random Primer 1μl
Rnase Free H2O Up to 20μl
*注：反轉(zhuǎn)錄引物可根據(jù)需要改用特異性引物。
2.根據(jù)實(shí)際情況反轉(zhuǎn)錄可選擇快速程序或標(biāo)準(zhǔn)程序
快速程序
37°C 15~30min（cDNA 合成）
85°C 5min（失活 MLV）
標(biāo)準(zhǔn)程序
25°C 10min（引物配對）
55°C 30~60min（cDNA 合成）
85°C 5min（失活 MLV）
注：通常在定量 PCR 實(shí)驗(yàn)中使用快速程序進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄效率>80%），在進(jìn)行高 GC 含量、含復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)、長片段的模板轉(zhuǎn)錄時(shí)采用標(biāo)準(zhǔn)程序（反轉(zhuǎn)錄效率>100%）。
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