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?二抗(secondary antibody)?:直接與靶抗原連接的一抗結(jié)合,通常用于標記和檢測一抗。二抗可以是完整抗體或抗體片段,如IgG分子、Fab片段以及F(ab’)2片段。
選擇二抗時需要考慮的因素:
1、?一抗的種屬來源?:二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來源。例如,如果一抗是小鼠源的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗(如山羊抗小鼠或兔抗小鼠)。
2、?一抗的類別和亞類?:二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體;單克隆抗體由于存在不同的亞型,選擇二抗時需要根據(jù)一抗的類型或亞類相匹配。
3、?實驗類型?:不同的實驗類型可能需要不同類型的二抗。例如,在雙標實驗中,如果兩個一抗分別來自不同的種屬,則二抗應(yīng)選擇來自第三種種屬的抗體,以避免交叉反應(yīng)。
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