培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | BJ-X96589 |
商品介紹：
名稱 D283 Med (腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 別稱D283 MED; D283-MED; D-283 Med; D-283MED; D283MED; D283Med; D283-Med; D283; Med 283; H283 種屬人類 年齡（性別）男性，6歲 組織來(lái)源小腦 生長(zhǎng)特性半貼壁半懸浮 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述D283 Med細(xì)胞是由Friedman等人于1985年建系，源自一名6歲患有神經(jīng)管細(xì)胞瘤有腹腔轉(zhuǎn)移的白人男性小孩的腹水細(xì)胞。 生物安全等級(jí)1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時(shí)間~ 52 小時(shí) 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO?，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice(The cells form serially transplantable intercranial and subcutaneous tumors.) Yes, in soft agar 基因表達(dá)情況The cells produce tumors in nude mice and the resulting tumors are glutamine synthetase positive; neuron specific enolase positive; glial fibrillary acidic proteins negative; S100 (S-100) protein negative; The cells express elevated levels of four biochemical markers of SCLC (neuron specific enolase; the brain isoenzyme of creatine kinase; L-DOPA decarboxylase; bombesin-like immunoreactivity) |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
人 TNFA 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
人 PPP2CA 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
人 IL6 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
小鼠 IL2RB / CD122 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
小鼠 IL2RB / CD122 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
小鼠 ERBB2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
人 HHIP 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
人 HHIP 基因全長(zhǎng)ORF
D283 Med (腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞)2 ug pYr-1.1-hU6-EGFP（可包裝腺病毒） pYr-1.1-hU6-EGFP（可包裝腺病毒） 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人前列腺雄激素調(diào)節(jié)粘蛋白樣蛋白1 (PARM-1)ELISA試劑盒
1 管 TH1大腸桿菌 TH1 E.coli Strain -80℃保存 0.312-20 ng/mL 人基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)ELISA試劑盒
50次 柱式昆蟲DNAout Column Insect DNAOUT 常溫 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Prolactin-inducible protein
250mL Veronal Buffered Saline with EDTA (VBSE) Veronal Buffered Saline with EDTA (VBSE) 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Protein S100-A11
5g Chloramphenicol 室溫保存 78-5000 pg/mL 人背板同源蛋白ELISA試劑盒
1g CHAPS CHAPS 室溫保存 31.2-2000 pg/mL 人胸腺基質(zhì)淋巴生成素(Thymic stromal lymphopoietin)ELISA試劑盒
24T 總巰基測(cè)試盒/總脂測(cè)試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存DME培養(yǎng)基進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)DMEM10升高糖，含丙酮酸鈉和胺
50mL Q交換介質(zhì) Q Medium 常溫干燥封袋保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Sestrin-1
125mL Triton Lysis Buffer,2X Triton Lysis Buffer,2X 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Vascular cell adhesion protein 1
10次 一站式檢測(cè)TUNEL試劑盒（DAB法） One-Stop Biotin-Based TUNEL Kit -20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Transmembrane protease serine 4
2216E瓊脂 2216E Agar 250gx
