操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價，貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96478 |
商品屬性：
名稱 MLTC-1 (小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞) 別稱mLTC-1; Murine Leydig Tumor Cell line-1 種屬小鼠 年齡（性別）雄性 組織來源睪丸；Leydig細(xì)胞；Leydig細(xì)胞瘤 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述MLTC-1細(xì)胞是從C57BL/6小鼠移植的M548OP Leydig細(xì)胞腫瘤中建立；MLTC-1細(xì)胞保留了原始腫瘤對激素的反應(yīng)。在(hCG)、黃體激素、霍亂毒素、氟化鈉和脒基-5'-亞氨基二磷酸鹽處理下，MLTC-1細(xì)胞的膜腺苷酸環(huán)化酶活性提高；在hCG作用下，MLTC-1細(xì)胞還可生成。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~35-40小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in C57BL/6 mice. 受體表達(dá)情況chorionic gonadotropin; luteinizing hormone (LH) 基因表達(dá)情況progesterone |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠 IL6 基因全長ORF克隆
大鼠 IL2 基因全長ORF克隆
大鼠 CD25 / IL2Ra 基因全長ORF克隆
大鼠 IL1RN / IL1F3 基因全長ORF克隆
大鼠 IL18 基因全長ORF克隆
大鼠 IgG2C 基因全長ORF克隆
大鼠 PDGFA 基因全長ORF克隆
大鼠 AMHR2 基因全長ORF克隆
大鼠 CXCL7 / Ppbp 基因全長ORF克隆
大鼠 UNC5B 基因全長ORF克隆
MLTC-1 (小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞)2 ug pEZZ18 pEZZ18 低溫運輸，-20℃保存哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)進口、國產(chǎn)Columbia Blood Agar Base營養(yǎng)非常豐富，用各種細(xì)菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(AFNOR EP IDF標(biāo)準(zhǔn))250
1瓶 WPMY-1株 WPMY-1 低溫運輸和保存發(fā)酵培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)Mannitol Ferment Medium250克腸道桿菌的鑒別，細(xì)菌發(fā)酵試驗
5 g Glucosamine （胰島素抵抗誘導(dǎo)劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 1.56-100 ng/mL 人轉(zhuǎn)錄因子AP-1(Transcription factor AP-1) ELISA試劑盒
雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（含小倒管） Double Lactose Peptone Broth 10ml*20支/包
D/E中和肉湯 D/E Ｎeutralizing Broth 250g
100mL Tricine Buffer,0.5M pH7.0 Tricine Buffer,0.5M pH7.0 常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Cytotoxic T-lymphocyte protein 4
2 ug TOPFlash TOPFlash 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 病毒通用型(AIV-U)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)
瓊脂培養(yǎng)基J Agar medium J (Deoxycholate citrate agar) 250g
2 ug pCMV-SPORT6 TTC14 pCMV-SPORT6 TTC14 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 U/mL 人線粒體烏頭酸水合(Aconitase)ELISA試劑盒
1瓶 35.1株 35.1 低溫運輸和保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1
1瓶 NCI-H522株 NCI-H522 低溫運輸和保存 12.5-800 pg/mL ELISA Kit for Human Beta-galactosidase
