操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價，貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96636 |
商品屬性：
名稱 B16-F1 (小鼠黑色素瘤細胞) 別稱B16/F1; B16 F1; B16F1 種屬小鼠 年齡（性別）不詳 組織來源皮膚 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述B16-F1細胞是B16-F0細胞的亞系，源自黑色素瘤C57BL/6J荷瘤小鼠的皮膚；B16-F1細胞可產(chǎn)生黑色素。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in syngeneic mice. 注意事項B16系列細胞，使用DMEM培養(yǎng)時可能出現(xiàn)黑色素快速積累，細胞不增殖或死亡的情況，若您需要分泌黑色素相關(guān)實驗可更換為DMEM培養(yǎng)。 |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人 HER3 / ErbB3 ELISA配對抗體
人 Cystatin S / CST4 ELISA配對抗體
人 Carboxypeptidase B1 / CPB1 ELISA配對抗體
人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 ELISA配對抗體
人 KSP-Cadherin / Cadherin-16 / CDH16 ELISA配對抗體
人 Carbonic Anhydrase XII / CA12 ELISA配對抗體
人 CD86 / B7-2 ELISA配對抗體
人 VWC2 EL
B16-F1 (小鼠黑色素瘤細胞)阪崎腸桿菌成套生化鑒定管 biochemical identification of sets of tubes 11種*2套/盒*5盒 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Asprosin
250mL TAE電泳液,50× TAE Buffer, 50× 常溫 78-5000 pg/mL 人VGF神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白ELISA試劑盒
25 mg TSQ（6-甲氧基-（8-p-甲苯磺酰胺） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存緩沖李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)進口、國產(chǎn)Buffered Listeria Enrichment Broth用于李氏菌的增菌培養(yǎng)(MercK標準)250
1瓶 WI-38 [WI38]株 WI-38 [WI38] 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/ml 豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
纖維二糖-O157菌生化鑒定 20支
1g 阿利新藍 8GX Alcian Blue8GX 室溫干燥保存 31.2-2000 pg/mL 人腦啡肽2(Neprilysin 2)ELISA試劑盒
假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基F Pseudomonas Agar for Detection of Fluorescin 250g 1.56-100 ng/mL 人高密度脂蛋白結(jié)合蛋白(HDLBP)ELISA試劑盒
改良Camp-BAP氏瓊脂添加劑B Modified Camp-BAP Agar additive B 1ml*5 0.156-10 ng/mL 人神經(jīng)連接蛋白3(Neuroligin-3)ELISA試劑盒
50T 惡性瘧PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存 0.47-30 ng/mL 人金屬硫蛋白1E(MT1E)ELISA試劑盒
3%過氧化氫試劑 2ml*20支葡萄球菌選擇性瓊脂 進口、國產(chǎn)Staphylococcus Selective Agar用于凝固陽性葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)250
1瓶 FC33株 FC33 低溫運輸和保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Leucyl-cystinyl aminopeptidase
