操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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產品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96454 |
商品屬性：
名稱 L1210 (小鼠白血病細胞) 別稱L 1210; L-1210; Leukemic 1210; Leukemia 1210; Leukemia L1210 種屬小鼠 年齡（性別）雌性，8個月 組織來源淋巴細胞白血病 生長特性懸浮細胞 細胞形態(tài)淋巴母細胞樣 背景描述L1210細胞的體外懸浮培養(yǎng)最早是由G·Moore等(1966年)和P·Himmelfarb等(1967年)報導，源于用0.2%甲基膽蒽(溶解)涂抹雌性小鼠的皮膚誘發(fā)的腫瘤。L1210細胞廣泛用于化學因子和天然產物細胞毒活性的常規(guī)篩選；L1210細胞接種裸鼠在21天內100%(5/5)成瘤。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例5×10^4cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~16-48小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice. 注意事項該細胞為懸浮細胞，請注意離心收集細胞懸液；請勿直接倒掉細胞培養(yǎng)液。 |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠 CD68 基因全長ORF克隆
大鼠 EPCAM 基因全長ORF克隆
大鼠 CD47 基因全長ORF克隆
大鼠 CD63 基因全長ORF克隆
大鼠 CD53 基因全長ORF克隆
大鼠 CD28 基因全長ORF克隆
大鼠 KLRD1 基因全長ORF克隆
大鼠 REG1A 基因全長ORF克隆
大鼠 CD59 基因全長ORF克隆
大鼠 CD52 基因全長ORF克隆
L1210 (小鼠白血病細胞)10mg 5′ - 三鳥苷三鈉 Guanosine 5′-Triphosphate (GTP),Trisodium -20℃保存
1瓶 NCI-H157株 NCI-H157 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL 人C型凝集素結構域家族4成員E(CLEC4E)ELISA試劑盒
50T 單增李斯特菌prfA基因(274bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
2 ug pG5-Luc pG5-Luc 低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 U/mL ELISA Kit for Human Docking protein 6
10 mg Hydroxystilbamidine Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Interferon-induced protein 44
肉浸液肉湯培養(yǎng)基 Meat Infusion Broth 250g 1.56-100 nmol/mL ELISA Kit for Valine
2 ug pCAMBIA1305 pCAMBIA1305 低溫運輸，-20℃保存
5次 中提柱式BAC DNAout Midi Column BAC DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存) 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human C-X-C motif chemokine 6
2 ug pcDNA4/TO/Myc-His C pcDNA4/TO/Myc-His C 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Major vault protein
2 ug pAAV-LacZ pAAV-LacZ 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 nmol/mL 雌二醇(E2)ELISA試劑盒
0.1%溶液 1ml*5 78-5000 pg/mL 人S100鈣結合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)ELISA試劑盒
