PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
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參數(shù)規(guī)格：
產品名稱：嗜水氣單胞菌核酸檢測試劑盒
產品規(guī)格：50T
產品貨號：FS-P9884
產品分類：熒光PCR法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
rrIL-18, CF (25 UG)名稱: 抗人IgM小鼠雜交瘤；3C6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-18 (25 UG)名稱: 抗赭曲霉素A雜交瘤；Z01 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-17F, CF (25 UG)名稱: 抗CEA小鼠雜交瘤；C1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-17F (25 UG)名稱: 抗B1小鼠雜交瘤；B01 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-13, CF (25 UG)名稱: 抗肝生長因子(HGF)雜交瘤；HGF1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-13 (25 UG)名稱: 抗肝生長因子(HGF)雜交瘤；HGF2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-12, CF (10 UG)名稱: 抗CEA小鼠雜交瘤；C2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-12 (10 UG)名稱: 抗抗人垂體泌乳素雜交瘤；PRL2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-10, CF (5 UG)名稱: 抗抗人垂體泌乳素雜交瘤；PRL1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-10, CF (25 UG)名稱: 抗精核蛋白；HP1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-10 (Cys167Tyr), CF (10 UG)名稱: 抗精核蛋白；HP2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-10 (Cys167Tyr) (10 UG)名稱: 抗精核蛋白；HP3 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-10 (5 UG)名稱: 抗小鼠雜交瘤；D7 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-10 (25 UG)名稱: 抗孕雜交瘤；P01 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-1 Rrp2/Fc, CF (100 UG)名稱: 抗睪小鼠雜交瘤；T01 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIL-1 RI/Fc, CF (100 UG)名稱: 抗人絨毛膜促性腺激素α雜交瘤；H80X RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
嗜水氣單胞菌核酸檢測試劑盒人組織蛋白酶D(cath-D)ELISA試劑盒LAC/LAELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人組織多肽特異性抗原(TPS)ELISA試劑盒LAMELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人腎小球組織糖基化終末產物(GTE-AGE)ELISA試劑盒LAPELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人不對稱二甲基精氨(ADMA)ELISA試劑盒LATELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人補體片斷5b(C5b)ELISA試劑盒LATELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人補體片斷4b(C4b)ELISA試劑盒LATSELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人補體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒LBPELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人多形核白細胞彈性蛋白酶(PMNElastase)ELISA試劑盒LBPELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
