細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱 | C2C12 (小鼠成肌細(xì)胞) |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96364 |
商品屬性：
名稱 C2C12 (小鼠成肌細(xì)胞) 別稱C2c12; C2-C12; C12 種屬小鼠 年齡（性別）不詳 組織來源骨骼??；品系：C3H 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)成肌細(xì)胞樣 背景描述C2C12細(xì)胞是由D·Yaffe和O·Saxel建立的小鼠成肌細(xì)胞株的亞克??；C2C12細(xì)胞分化很快，形成可伸縮的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)處理C2C12細(xì)胞，會導(dǎo)致C2C12細(xì)胞的分化途徑從成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)換為成骨細(xì)胞。檢測表明，C2C12細(xì)胞肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~20小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 注意事項該細(xì)胞貼壁松散，操作時請盡量輕柔；換液時需預(yù)熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán)，為正?，F(xiàn)象，請按照收貨注意事項處理。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
大鼠 GOLPH3L 基因全長ORF克隆
大鼠 OLA1 基因全長ORF克隆
大鼠 PRRC1 基因全長ORF克隆
大鼠 TPI1 基因全長ORF克隆
大鼠 HNRNPC 基因全長ORF克隆
大鼠 EHD3 基因全長ORF克隆
大鼠 ITFG1 基因全長ORF克隆
大鼠 ATP5A1 基因全長ORF克隆
大鼠 ACO2 基因全長ORF克隆
大鼠 AQP9 基因全長ORF克隆
C2C12 (小鼠成肌細(xì)胞)50T 乙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
2 ug pspAX2 pspAX2 低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Placental protein 13-like
FS培養(yǎng)基 FS Medium 250g 7.8-500 ng/mL ELISA Kit for Vanillylmandelic acid
0.1mL 松弛素B溶液,20mg/mL Cytochalasin B Solution -20℃避光保存
5次 TMB法辛雜交試劑盒 0.312-20 ng/mL 人3-羥氨苯甲酸3,4-加雙氧(3-HAO)ELISA試劑盒
2 ug pLVX-PAmCherry-N1 pLVX-PAmCherry-N1 低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Beta-amyloid protein 42
2 ug pGEX-20T pGEX-20T 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人原鈣黏素1(PCDH1)ELISA試劑盒
100µL 山羊抗人IgG（H+L)，堿性標(biāo)記 Goat Anti-Human IgG(H+L),AP -20℃保存三號膽鹽進(jìn)口、國產(chǎn) 3 Bile Salt 用于抑制革蘭氏陽性菌的生長100
2 ug pGreen0029 pGreen0029 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人脂質(zhì)相關(guān)蛋白4型(LPPR4)ELISA試劑盒
SCHAEDLER瓊脂 SCHAEDLER AGAR 250g 0.312-20 ng/mL. ELISA Kit for Human Protein Wnt-10b
50mL Manganese Chloride Solution（溶液）,1M Manganese Chloride Solution,1M 常溫保存MiddleBrook 7H10瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)MiddleBrook 7H10 Agar250克分枝桿菌的分離培養(yǎng)
