細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X97004 |
商品屬性：
名稱 雞肺動脈內(nèi)皮細胞 2.組織來源：肺動脈組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 雞肺大動脈內(nèi)皮細胞分離自肺大動脈組織；肺大動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈。肺大動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行。細胞呈單層多角形鋪路石狀分布；該細胞在維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡、合成和分泌細胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡中起重要作用。肺大動脈內(nèi)皮細胞呈單層多角形鋪路石狀分布，該細胞在維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡、合成和分泌細胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡中起重要作用。 5.方法簡介： ()實驗室分離的雞肺大動脈內(nèi)皮細胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： ()實驗室分離的雞肺動脈內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-C003 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)內(nèi)皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
重組人 CXCL12 / SDF1b 蛋白 (Fc 標簽)
重組人 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (His 標簽)
重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 (Fc 標簽)
重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白
重組大鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 標簽)
重組大鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (His 標簽)
重組小鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (His 標簽)
重組小鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 標簽)
重組小鼠 M-C
雞肺動脈內(nèi)皮細胞Radix ginseng人參探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周TCTP 翻譯控制瘤蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Ndumu Virus恩杜姆病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Sortilin/NTR3/Gp95 神經(jīng)降壓素受體3抗體（糖蛋白95） 規(guī)格: 0.2ml
Raccoonpox virus浣熊痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周KLHL7 kelch樣蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml
Pasteurella multocida兔巴氏桿PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CCDC68/se57-1 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白68抗體(皮膚T淋巴細胞相關抗原) 規(guī)格: 0.2ml
虎源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Prkg1/cGKI cGMP依賴性蛋白激1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Stenotrophomonas maltophilia嗜麥芽窄食單胞探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ESYT2/FAM62B 延伸突觸蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Prunus Necrotic Ringspot Virus(PNRSV)李屬壞死環(huán)斑病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ARK5 AMPK的相關蛋白激5抗體 規(guī)格: 0.2ml
Fructus aristolochiae馬兜鈴PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Rabbit anti-Biotin whole serum 兔抗抗清 規(guī)格: 1ml
Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒G亞群RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat anti-Mouse IgM whole serum 羊抗小鼠IgM抗清 規(guī)格: 1ml
Epizootic Hemorrhagic Disease Virus(EHDV)流行性出血熱病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-Myosin light chain(Ser20) 磷酸化肌球蛋白輕鏈抗體 規(guī)格: 0.1ml
