服務(wù)流程：
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
真鯛虹彩病毒PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013514 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
豬血管緊張素II受體1抗體(ANGⅡR1-Ab) 三(2,2,6,6-四-3,5-庚二酮酸)鐠(III)(＞98%(T))FAM135B蛋白抗體
豬N-酰半乳糖-6-硫酸酯酶(GAS)三(2,2,6,6-四-3,5-庚二酮酸)銪(III)(＞95%(T))“衰老關(guān)鍵蛋白”抗體
豬多肽YY (PYY)三(6,6,7,7,8,8,8-七氟-2,2-二-3,5-辛二酮)鐠(Ⅲ)(>97.0%(T))促卵泡激素受體抗體
豬TATA框結(jié)合蛋白相關(guān)因子13(TAF13)(S)-(+)-1,1'-聯(lián)萘-2,2'-雙磷酸氫酯(>97.0%(T))成纖維生長因子12抗體
豬凋亡信號調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1) (R,R)-(-)-2,3-丁二(>96.0%(GC))成纖維生長因子14抗體
豬黑素瘤抑制性活性蛋白1(MIA1) (S,S)-(+)-2,3-丁二(>97.0%(GC))腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體
豬新蝶呤 (Neopterin) (+)-芐硅酸(>98.0%(T))FAM96B蛋白抗體
豬信號素3A(SEMA3A)(-)-芐硅酸(>98.0%(T))腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體
豬維生素D受體(VDR)(-)-樟腦烷酸(>98.0%(T))FAM29蛋白抗體
豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SPD)(R)-(-)-N-(3,5-二酰)-α-MaFF相關(guān)蛋白抗體
豬瘦素受體(LEPR)(R)-(-)-N-(3,5-二酰)-α-甘氨酸(>98.0%(HPLC)(T))凝血因子7抗體
豬防御素α5(DEFα5)(1S,2S)-(-)-1,2-二二(>98.0%(GC)(T))FEM1B抗體
豬端粒酶(TE)(1R,2R)-(+)-1,2-二二(>97.0%(GC)(T))纖維母生長因子3抗體
豬類粘蛋白2(ORM2) (1R,2R)-(-)-N,N'-二環(huán)己烷-1,2-二(>94.0%(GC))纖維母生長因子4抗體
豬血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C)(1S,2S)-(+)-N,N'-二環(huán)己烷-1,2-二(>98.0%(GC))FRA-1蛋白抗體
豬c-fos (R)-(+)-α-芐異酸酯(>98.0%(GC))精神發(fā)育遲滯相關(guān)蛋白抗體
真鯛虹彩病毒PCR試劑盒Phospho-PKA C (Thr197) 磷酸化蛋白激酶C亞性抗體四 ACS，>99.5% (GC)
PKB/AKT-1 蛋白激酶B（小鼠來源抗體）四氯烯 CP，97%
PLASTIN3/T Plastin 絲束蛋白T Plastin抗體硫代酸 AR,90.0%
PLC beta 3/Phospholipase C beta 3 磷酯酶Cβ3抗體硫代酸 GR,98%
Phospho-PLC beta3 (Ser537) 磷酸化磷酯酶Cβ3抗體硫代酸 CP,85.0%
Phospho-PLC beta3 (Ser1105) 磷酸化磷酯酶Cβ3抗體3,5,5-己酸 97%
PKC beta 1/2 蛋白激酶C beta 1/2抗體叔丁 HPLC，>99.5%(GC)
phospho-PKC (Thr500) 磷酸化蛋白激酶C(T500)抗體叔丁 GR，≥99.5% (GC)
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
