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T25m2 小鼠小腸平滑肌細胞提取物操作

參考價
面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 型號T25m2
  • 品牌
  • 所在地上海市
  • 更新時間2021-06-21
  • 廠商性質經(jīng)銷商
  • 入駐年限9
  • 實名認證已認證
  • 產(chǎn)品數(shù)量9294
  • 人氣值267065
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小鼠小腸平滑肌細胞提取物操作收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
小鼠小腸平滑肌細胞提取物操作 產(chǎn)品詳情

注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37,5%CO2培養(yǎng)。

產(chǎn)品名稱

小鼠小腸平滑肌細胞提取物操作

規(guī)格

T25m2

貨號

CS-964044

小鼠小腸平滑肌細胞提取物【Mouse Intestine: Normal Small Intestinal Smooth Muscle Cell Derivatives】小鼠小腸平滑肌細胞提取物是從小鼠小腸平滑肌細胞提取的,小鼠小腸平滑肌細胞從正常小鼠小腸組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mgRNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊)
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 
2
.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
3
.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4
.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 
5
.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
3、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 ,5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
1158279-20-9  HLCL-61  25mg  Cochliomyia hominivorax嗜錐蠅探針法熒光定量PCR試劑盒 

1158279-20-9  HLCL-61  5mg  Mouse Pox Virus(MPV)鼠痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 

1158-35-6  H-D-Lys(Z)-OMe . HCl  1g  Stenotrophomonas maltophilia嗜麥芽窄食單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒 

1158-35-6  H-D-Lys(Z)-OMe . HCl  25g  Ancylostoma duodenale十二指腸鉤口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 

1158-35-6  H-D-Lys(Z)-OMe . HCl  5g  Stenotrophomonas maltophilia嗜麥芽窄食單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒
FIGF Protein Human 重組 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 (His 標簽)DL-半胱氨酸DL-Cysteine 質量規(guī)格:>97%,易氧化

小鼠神經(jīng)質細胞(MN-sn)(1×106) T24, 膀胱癌細胞 HumanL-谷氨酰胺叔丁酯鹽酸鹽L-Glutamine t-butyl ester 質量規(guī)格:0.98

犬腎細胞;MDCK(NBL-2)L-谷氨酸-5-叔丁酯-1-甲酯鹽酸鹽L-Glutamic acid 5-tert-butyl 1-methyl ester  質量規(guī)格:>95%,BR

GAD2 Others Mouse 小鼠 GAD65 / GAD2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N-芐基甘氨酸鹽酸鹽Bzl-Gly-OH·HCl質量規(guī)格:0.98

皮膚肥大細胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)甘氨酸芐酯鹽酸鹽Glycine benzyl ester 質量規(guī)格:0.98
小鼠小腸平滑肌細胞提取物操作非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2N-(1,3,4-Thiadiazolyl)煙酰胺質量規(guī)格:美國進口N-(1,3,4-Thiadiazolyl)nicotinamide

FN1 Others Human  Fibronectin / Fibronectin Fragme 2 細胞裂解液 (陽性對照) β-煙酰胺單核苷酸質量規(guī)格:美國進口β-Nicotinamide mononucleotide

615小鼠T細胞性白血病瘤株;L7712環(huán)丙孕酮質量規(guī)格:美國進口Cyproterone

MAP2K6 Others Human  MKK6 / MEK6 / MAP2K6 (207 Ser/Asp, 211 Thr/Asp) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 15β-羥基醋酸環(huán)丙孕酮質量規(guī)格:美國進口15β-Hydroxy Cyproterone Acetate

CM-M017小鼠胰腺導管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL咽側體抑制素Ⅳ質量規(guī)格:>95%,BRAllatostatin IV

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