人腎系膜細胞提取物【Human Kidney : Normal Renal Mesangial Cell Derivatives】 人腎系膜細胞提取物是從人腎系膜細胞提取的，人腎系膜細胞從正常人腎組織制備。正常人腎組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。
潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 人腎系膜細胞提取物說明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963983 |
收到凍存細胞的處理方法：
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細胞）；
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；
5.置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
1168091-68-6 GDC-0623 10mM(in1mLDMSO) Camel Pox Virus(CPV駱駝痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
1168091-68-6 GDC-0623 25mg Volepox Virus田鼠痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
1168091-68-6 GDC-0623 5mg Camel Pox Virus(CPV駱駝痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
1168-42-9 Scutellarein tetramethyl ether 1mg Rocio Virus羅西奧病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
116861-26-8 Fmoc-D-Ser-OH 25g Ross River Virus(RRV)羅斯河病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
CDC37 Others Mouse 小鼠 CDC37 / CDC37A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) α-煙酰胺腺嘌呤二核苷1酸,縮減二鈉鹽α-Nicotinamide adenine dinucleotide, reduced di salt質(zhì)量規(guī)格：美國進口
腎小球內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)β-NADP-二醛β-NADP-dialdehyde質(zhì)量規(guī)格：美國進口
草魚肝臟細胞;L8824 視網(wǎng)膜母細胞瘤，WERI-Rb-1細胞 KB(口腔表皮樣癌細胞)9-苯基蒽(>98.0%(GC))9-Phenylanthracene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)
腦瘤細胞;SF767N-苯基-9-蒽胺(>98.0%(GC))N-Phenyl-9-anthramine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)
REG1B Others Human REG1B / PSPS2 細胞裂解液 (陽性對照) 1-萘(>98.0%(GC))1-Iodonaphthalene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)
人腎系膜細胞提取物說明SLIK4 Others Human SLIK4 / Slik4 細胞裂解液 (陽性對照) ?；秦i去氧膽酸鈉質(zhì)量規(guī)格：≥98%,美國進口 taurohyodeoxycholate hydrate
Calu-3 肺腺癌細胞(胸膜滲出液)磺丁基-β-環(huán)糊精;磺丁基倍他環(huán)糊精鈉質(zhì)量規(guī)格：>99%,USPCaptisol( beta-Cyclodextrin, sulfobutyl ethers, salts)
BGC-823-EGFP-puro胃癌細胞 Human gasic cancer cells BGC-823-EGFP-puro 1640+10% Hyclone滅活血清+2ug/ml puromycin纈氨霉素質(zhì)量規(guī)格：>95% (HPLC),進分Valinomycin
BMP2 Protein Human 重組 BMP-2 蛋白 (Fc 標簽)5-氯-1，3-二甲基吡唑 質(zhì)量規(guī)格：>98%，5-Chloro-1,3-dimethyl-1H-pyrazole
心臟微血管內(nèi)皮細胞 (HCMEC)( 5×105 ) SF9, 昆蟲卵巢細胞 其它甘氨鵝脫氧膽酸鈉質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRGlycochenodeoxycholic Acid Salt
注意事項：
1.接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
