注意事項：
1.接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
產品名稱 | 小鼠肺大靜脈內皮細胞提取物價格 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-964050 |
小鼠肺大靜脈內皮細胞提取物【Mouse Lung: Normal Vein Endothelial Cell Derivatives】小鼠肺大靜脈內皮細胞提取物是從小鼠肺大靜脈內皮細胞提取的，小鼠肺大靜脈內皮細胞從正常小鼠肺大靜脈組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。
潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法：
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基；
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細胞）；
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T25培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；
5.置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
115730-24-0 ZT 52656A hydrochloride 1mg Tick-borne Encephalitis Virus(TBEV)蜱傳腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
115730-24-0 ZT 52656A hydrochloride 20mg Xinjiang Hemorrhagic Fever Virus(XHFV)新疆出血熱病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
115730-24-0 ZT 52656A hydrochloride 5mg Avian Pox virus(APV)禽痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
1157-39-7 4’,7-Dimethoxyisoflavone (Dimethoxydaidzein) 10mg Enteric Virus-72(EV-72)腸道病毒72型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
1157-39-7 4’,7-Dimethoxyisoflavone (Dimethoxydaidzein) 5mg Xinjiang Hemorrhagic Fever Virus(XHFV)新疆出血熱病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
GSK3B Others Mouse 小鼠 GSK3B 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Amberlite® IRP-69陽離子交換樹脂 Amberlite® IRP-69質量規(guī)格：
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A4氨苯砜(標準品)4,4'-Diaminodiphenylsulfone質量規(guī)格：含量測定
TE-11細胞，食管癌細胞 食管癌細胞,CaEs-17細胞 大鼠胰腺外分泌腺細胞;AR42J茶苯海明（標準品）Dimenhydrinate質量規(guī)格：HPLC法含量測定
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B2醋酸潑尼龍（標準品）Prednisolone acetate質量規(guī)格：含量測定
ICAM1 Others Human ICAM-1 / CD54 細胞裂解液 (陽性對照) 醋酸曲安奈德（標準品）xx質量規(guī)格：含量測定
小鼠肺大靜脈內皮細胞提取物價格髓核細胞HNPC己二酸二甲酯(standard for GC,≥99.5%(GC))質量規(guī)格：standard for GC,≥99.5%(GC)Dimethyl adipate
9L-E細胞，前列腺癌細胞 果子貍腎上皮細胞,Hed68細胞 小鼠腦脊神經元MN-r馬來酸二丁酯(standard for GC,≥99.5%(GC))質量規(guī)格：standard for GC,≥99.5%(GC)Dibutyl maleate
KiMA(胚腎上皮細胞系) 5×106cells/瓶×2三水合鹽酸鹽質量規(guī)格：>98%,三水合物Vardenafil trihydrate
A673(橫紋肌瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R011大鼠肺大動脈內皮細胞*培養(yǎng)基100mL 正常肺上皮細胞;BEAS-2B三水合鹽酸鹽(標準品)質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品Vardenafil trihydrate
CM-H127晶狀體上皮細胞*培養(yǎng)基100mL抑氨肽酶,烏苯美司,貝他定，苯丁抑制素質量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于細胞培養(yǎng)Bestatin,Ubenimex
