細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928操作步驟
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928操作步驟細(xì)胞培養(yǎng)
1、冷凍管應(yīng)如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí), 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí), 是否應(yīng)馬上去除DMSO?
除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感之細(xì)胞外, 絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞), 在解凍之后, 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長(zhǎng)或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng), 造成細(xì)胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來源, 所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活。
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928操作步驟復(fù)蘇操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
公司細(xì)胞庫細(xì)胞株種類齊全:大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株,如:人滑膜細(xì)胞,人胃癌細(xì)胞,人細(xì)胞,人腎近曲小管上皮細(xì)胞,肝癌細(xì)胞,心肌細(xì)胞,子宮內(nèi)膜細(xì)胞等。細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿,光澤度好,*,專業(yè)技術(shù)指導(dǎo),另有細(xì)胞培養(yǎng)類產(chǎn)品胎牛血清、小牛血清、DMSO、雙抗、胰酶、DMEM、1640培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等產(chǎn)品。歡迎廣大科研用戶!
促黃體激素(LH)ELISA試劑盒 ,英文名: LH ELISA Kit
促紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒 ,英文名: EPO ELISA Kit
促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3(MAPKAPK3)ELISA試劑盒 ,英文名: MAPKAPK3 ELISA Kit
雌一醇(E1)ELISA試劑盒 ,英文名: E1 ELISA Kit
雌酮(estrone,E1)ELISA試劑盒 ,英文名: estrone,E1 ELISA Kit
雌三醇(E3)ELISA試劑盒 ,英文名: E3 ELISA Kit
雌激素受體β(ESR2)ELISA試劑盒 ,英文名: ESR2 ELISA Kit
雌激素受體(ER)ELISA試劑盒 ,英文名: ER ELISA Kit
雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶(SULT1E1)ELISA試劑盒 ,英文名: SULT1E1 ELISA Kit
雌激素(E)ELISA試劑盒 ,英文名: E ELISA Kit
雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒 ,英文名: ER ELISA Kit
雌二醇(E2)ELISA試劑盒 ,英文名: E2 ELISA Kit
小鼠白介素13(IL-13)免疫試劑盒 Mouse Interleukin 13,IL-13 ELISA Kit
小鼠白介素12(IL-12/P70)免疫試劑盒 Mouse Interleukin 12,IL-12/P70 ELISA KIT
小鼠白介素12(IL-12/P40)免疫試劑盒 Mouse interleukin 12,IL-12/P40 ELISA KIT
小鼠白介素11(IL-11)免疫試劑盒 Mouse Interleukin 11,IL-11 ELISA KIT
小鼠白介素10(IL-10)免疫試劑盒 Mouse interleukin 10,IL-10 ELISA KIT
小鼠白喉IgG抗體免疫試劑盒 Mouse Diphtheria IgG antibody ELISA Kit
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928操作步驟小鼠白蛋白免疫試劑盒 Mouse albumin ELISA Kit
小鼠胺氧化酶(含黃素)A(MAOA)免疫試劑盒 Mouse Amine oxidase [flavin-containing] A(MAOA) ELISA kit
小鼠癌胚抗原(CEA)免疫試劑盒 Mouse carcinoembryonic antign,CEA ELISA Kit
小鼠阿立新A(Orexin A)免疫試劑盒 Mouse Orexin A ELISA Kit